Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Interleukin 11 (IL-11) is a multifunctional cytokine in the IL-6 type family of long-chain
helical cytokines, which modulates the proliferation, differentiation and maturation of various types of
hematopoietic cells. Recombinant human interleukin-11 (rhIL-11) produced by DNA technology in
Escherichia coli is currently being used worldwide for the prevention of thrombocytopenia and to
reduce the need for platelet transfusions after myelosuppressive chemotherapy in patients with
nonmyeloid malignancies. A stability-indicating reversed-phase liquid chromatography (RP-LC)
method was validated for the assessment of recombinant human interleukin-11 (rhIL-11) in
biopharmaceutical formulations. The RP-LC method was carried out on a Jupiter C4 column (250 mm
x 4.6 mm i.d.), maintained at 25ºC. The mobile phase A consisted of 0.1% TFA and the mobile phase
B was acetonitrile with 0.1% TFA, run as follows: time 0 to 0.1 min 40% of B; from 0.1 to 30 min
linear up to 65% of B; from 30.01 to 31 min linear down to 40% of B, maintained up to 40 min. The
flow rate was 1 mL/min, and using photodiode array (PDA) detection at 214 nm. Chromatographic
separation was obtained with a retention time of 27.6 min, and was linear over the concentration range
of 1 200 μg/mL (r2 = 0.9995). The limits of detection and quantitation were 0.34 and 1.12 μg/mL,
respectively. Specificity was established in degradation studies, which also showed that there was no
interference of the excipients. The accuracy was 100.22% with bias lower than 1.25%. Moreover, the
in vitro cytotoxicity test of the degraded products showed non-significant differences (p>0.05). The
proposed method was applied to the assessment of rhIL-11 and related proteins in biopharmaceutical
dosage forms, and the results were correlated to those of a bioassay, showing a higher mean difference
of the estimated content/potencies of 2.60% for the RP-LC method, aiming to establish new
alternatives to monitor stability, improve quality control and thereby assure therapeutic efficacy
of the biological medicine. / A interleucina 11 (IL-11) é uma citocina multifuncional que pertence a família da interleucina-
6 e estimula a proliferação, diferenciação e maturação de células hematopoiéticas. A interleucina-11
humana recombinante (rhIL-11) é produzida pela tecnologia do DNA em Escherichia coli e é usada
clinicamente para a prevenção de trombocitopenia grave e redução da necessidade de transfusão de
plaquetas após quimioterapia mielossupressiva em pacientes com neoplasias malignas não mielóides.
No presente trabalho foi desenvolvido e validado método por cromatografia líquida em fase reversa
(CL-FR) para a avaliação de rhIL-11 em formulações de produtos farmacêuticos. Utilizou-se coluna
Júpiter C4 (250 mm x 4,6 mm d.i.), mantida a 25ºC. A fase móvel A foi constituída de TFA 0,1% e a
fase móvel B de acetonitrila com 0,1% TFA, eluídas no seguinte gradiente: 0 0,1 min, 40% de B; 0,1
30 min, 40 65% de B; 30,01 a 31 min, 65 40% de B, mantendo-se nesta proporção até 40 min.
Utilizou-se vazão de 1 mL/min e detector de arranjo de diodos (DAD) a 214 nm. A eluição
cromatográfica foi obtida no tempo de 27,6 min, sendo linear na faixa de concentração de 1 200
μg/mL (r2 = 0,9995). Os limites de detecção e quantificação foram 0,34 e 1,12 μg/mL,
respectivamente. A especificidade foi avaliada em estudos de degradação, que também demonstraram
que não houve interferência dos excipientes. A exatidão foi 100,20%, com bias inferior a 1,25%. Além
disso, realizou-se o teste de citotoxicidade in vitro das formas degradadas, as quais não apresentaram
diferença significativa em relação a forma intacta (p>0,05). O método proposto foi aplicado para a
avaliação da potência de rhIL-11 e de proteínas relacionadas em formulações farmacêuticas, e os
resultados foram comparados com o bioensaio, observando-se diferenças das médias de
conteúdo/potência 2,60% superiores para o método por CL-FR. Contribuíu-se assim para estabelecer
procedimentos que aprimoram o controle da qualidade, garantindo a segurança e eficácia terapêutica
do produto biotecnológico.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsm.br:1/5925 |
| Date | 28 July 2011 |
| Creators | Souto, Ricardo Bizogne |
| Contributors | Dalmora, Sergio Luiz, Ribela, Maria Teresa de Carvalho Pinto, Macedo, Rui Oliveira |
| Publisher | Universidade Federal de Santa Maria, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, UFSM, BR, Farmacologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSM, instname:Universidade Federal de Santa Maria, instacron:UFSM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 201000000000, 400, 500, 300, 300, 300, c5c3d2e7-af0f-4f36-b006-046daf37340a, 82ee1ad8-40f9-4909-ba2b-254ec18bfeaa, c8f616ed-548b-4066-9e56-6b0f6146a148, 405b4742-8c76-4d3e-9a78-5761cc298cff |
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