Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2015. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-04-10T15:27:24Z
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2015_LilibetePereiradeOliveira.pdf: 832740 bytes, checksum: 639bc0308fdb43f58abcbf60390b2dd4 (MD5) / Em diversas regiões brasileiras os acidentes provocados por arraias dulcícolas são temidos por serem causa comum de necrose tissular e infecções bacterianas secundárias, que frequentemente implicam em incapacidade física temporária ou permanente. Estudos anteriores relatam a presença de atividades tóxicas, dentre as quais cardiotoxicidade, hiperalgesia, necrosante e edematogênica. Entretanto componentes envolvidos na citotoxicidade permaneciam sem caracterização. Identificação destes componentes é útil para a busca de tratamentos mais eficazes para este tipo de acidente. O presente trabalho objetivou identificar e caracterizar componentes citotóxicos do extrato do epitélio glandular que reveste o ferrão da arraia Potamotrygon falkneri. Os resultados obtidos evidenciam que o extrato obtido de um ferrão desta arraia possui aproximadamente 86 μg de protéinas, e seu perfil cromatográfico revelou 6 regiões com massa molecular variando de 14,4 a 97 kDa quando analisadas em SDS-PAGE. O extrato bruto do ferrão apresentou atividade hemolítica, fosfolipásica e citotóxica. 34 μg/mL do extrato bruto induziu 59 % de hemólise e a atividade fosfolipásica na presença de cálcio foi de 28.276 U/mg de proteína, enquanto na ausência de cálcio foi de 22.680 U/mg. O ensaio de citotoxicidade do extrato bruto foi realizado pelo método exclusão de azul de trypan na linhagem H9 em 6, 12 e 24 horas, resultando positivo no tempo de 24 horas. O extrato bruto e as regiões cromatográficas foram submetidas ao ensaio citotóxico e hemolítico, do qual uma fração apresentou índice citotóxico (região 1) e outra região apresentou hemolítico de 26% (região 5). O ensaio de citotoxicidade da região 5 também revelou citotoxicidade, além da capacidade hemolítica. A fração hemolítica e citotóxica foi purificada e submetida a espectrometria de massa, revelando três componentes com massas de 11.330,146 Da, 13.577,574 Da e 16.808,068 Da. Por fim, realizou-se o teste de hemólise indireta de fosfolipase A2 nesta fração, resultando em uma atividade de 103, 33 U/mg de fração. O presente trabalho, portanto, evidencia a presença de enzima fosfolipase A2, com atividade citotóxica em hemácias e células H9, no extrato da peçonha de P. falkneri e na fração estudada. / In several Brazilian regions accidents caused by freshwater stingrays are feared by causing tissue necrosis and secondary bacterial infections, often promoting temporary or permanent disability. Previous studies reported toxic activities as cardiotoxicity, hyperalgesy, necrotic and edematogenic, however cytotoxic compounds remained uncharacterized. Identifying these compounds is useful for the development of more effective treatments for this type of accident, and the present work aimed to identify and characterize cytotoxic components from the extract of the glandular tissue sting sheath of the stingray Potamotrygon falkneri. The results reveal approximately 86 μg/mL of protein on this extract, and its chromatographic profile revealed 6 regions with molecular masses between 14.4 and 97 kDa when analyzed on SDS-PAGE. The sting sheath extract also revealed haemolytic, phospholipasis and cytotoxic activities. 34 μg/mL of the crude extract induced 59.57% hemolysis and the phospholipase activity was 28276 U/mg protein in the presence of calcium, and 22680 U/mg in the absence of calcium. Cytotoxicity assay of the crude extracts was performed by blue trypan exclusion upon H9 lineage at 6, 12 and 24 hours, and with positive results in 24 hours. The crude extract and chromatographic fractions were subjected to hemolytic and cytotoxic assays, with one fraction revealing cytotoxic activity (region 1) and another with 26% hemolytic index (region 5). Region 5 also revealed citotoxicity, in addition to its haemolytic action. The cytotoxic and haemolytic fraction were purified and analyzed by mass spectrometry, revealing three compounds with masses of 11330.146Da, 13.577.574 Da and 16,808,068 Da. Further, a indirect hemolysis phospholipase A2 test was performed, resulting on 103.33 U/mg fraction activity. The present work reveals the presence of a phospholipase A2 enzyme, toxic for erythrocytes and H9 cells, on the extract of P. falkneri and the studied fraction.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/17896 |
| Date | 26 February 2015 |
| Creators | Oliveira, Lilibete Pereira de |
| Contributors | Schwartz, Elisabeth Nogueira Ferroni |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB |
| Rights | A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data., info:eu-repo/semantics/openAccess |
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