Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-01-17T13:16:28Z
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2016_MayaraOliveiraSousa.pdf: 1539457 bytes, checksum: 4b4e467f17e767ba5aef90063cd747b4 (MD5) / A proposta do presente trabalho foi entender a dinâmica da ocorrência de cianobactérias no lago Paranoá, pelo uso de ferramentas moleculares desenvolvidas para a identificação de cianobactérias potencialmente produtoras de toxinas, uma vez que, o Lago é um reservatório urbano, que será utilizado como fonte de abastecimento público. Dessa forma, é necessário monitorar a presença das cianobactérias potencialmente tóxicas, a fim de avaliar a qualidade da água do Lago. Para isso, foram coletadas amostras de água no período de 2012 a 2014. As amostras foram usadas em ensaios de PCR, com o emprego de oligonucleotídeos do gene 16 S DNAr, do operon da ficocinina e dos genes de síntese das microcistinas (mcyB e mcyD). Alguns dos resultados positivos das reações de PCR foram sequenciados para a identificação das cianobactérias presentes na área de estudo, e a quantificação das microcistinas foi realizada por meio do teste de ELISA. Foi detectada a presença de cianobactérias (avaliação qualitativa), por meio das reações de PCR convencional, em 97% das amostras de água avaliadas com os iniciadores do 16S DNAr. Os iniciadores referentes à porção da ficocianina (PCβF/PCαR) amplificaram somente 13,8% das amostras avaliadas. Com relação aos oligonucleotídeos dos genes de síntese das microcistinas (mcyB e mcyD), apenas um deles – mcyD – amplificou fragmento em uma única amostra. Isso provavelmente ocorreu devido à baixa concentração do DNA alvo no DNA genômico extraído do fitoplâncton e à presença de interferentes da PCR em amostras ambientais. É necessário o desenho de iniciadores específicos para as sequências de cianobactérias brasileiras. O resultado do sequenciamento revelou 100% de similaridade com a sequência de Radiocystis sp. JJ30-12. A presença de microcistinas foi constatada em todas as amostras avaliadas. Por fim, pode-se afirmar que as reações de PCR, utilizando iniciadores específicos relacionados com a síntese de cianotoxinas, como por exemplo, as microcistinas, podem ser úteis para a otimização das metodologias analíticas usadas para o monitoramento de reservatórios, e precisam de estudos mais aprofundados com o intuito de aprimorar os protocolos atualmente utilizados para a amplificação de fragmentos de interesse. Dessa forma, elas poderiam ser incluídas nas análises de rotina, em programas de monitoramento da qualidade da água, sendo úteis para identificação de cianobactérias. / The purpose of this work was to understand the dynamics of the occurence of cyanobacteria in lake Paranoa through of molecular tools developed for identifying of potentially cyanobacteria producing toxins, since the lake is an urban wealth that will be used as a source of public supply. Thus, it is necessary to monitor the presence of potentially toxic cyanobacteria, in order to evaluate the quality of the reservoir water. For this, water samples were collected in the period of 2012-2014. The samples were filtered and used in PCR assay, with the use of oligonucleotides 16 S rDNA gene, the ficocian operon and microcystins synthesis genes (mcyB and mcyD). Positive results of PCR reactions were sequenced to identifying the cyanobacteria present in the area of study and the quantification of microcystins was performed by ELISA kit. The cyanobacteria were detected (qualitative assessment) for conventional PCR reactions in 97% of water samples evaluated with the primers 16S rDNA. Primers related to phycocyanin (PCβF / PCαR) amplified only 13.8% of the samples. Regarding to oligonucleotide of gene synthesis of microcystins (mcyB and mcyD) only one of them - mcyD - amplified fragment in a single sample. This was probably due to low concentration of template DNA within genomic DNA extracted from phytoplankton and the presence of interfering PCR in environmental samples. It is necessary to design specific primers for sequences of Brazilian cyanobacteria. The result of sequencing showed 100% similarity with the sequence of Radiocystis sp. JJ30-12. The presence of microcystins was found in all samples. Finally, we can affirm that the PCR reactions using specific primers related to cyanotoxins synthesis, for example, microcystins can be useful for optimization of analytical methods used for the monitoring of reservoirs, and it need more studies in order to improve the protocols currently used for the amplification of fragments of interest. Thus, they could be included in routine analyzes, monitoring programs of water quality, and useful for cyanobacteria identification.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/22588 |
| Date | 10 October 2016 |
| Creators | Sousa, Mayara Oliveira |
| Contributors | Gomes, Lenora Nunes Ludolf |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB |
| Rights | A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data., info:eu-repo/semantics/openAccess |
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