Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by Fabrícia da Silva Costa Feitosa (fabriciascf@gmail.com) on 2010-01-13T22:33:36Z
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Previous issue date: 2007-11-13 / O Triatoma infestans, um dos vetores mais importantes da Doença de Chagas na América Latina, alimenta-se do sangue de vertebrados em todos os seus estágios – ninfas e adultos. As glândulas salivares de insetos hematófagos produzem compostos farmacologicamente potentes que impedem a hemostasia do hospedeiro, incluindo moléculas anticoagulantes, antiplaquetárias e vasodilatadoras. A saliva de T. infestans medeia a hidrólise de NDBC6HPC, um substrato para PAF-AH (platelet-activating factor-acetilhidrolase), em pH neutro. A purificação dessa atividade foi obtida por cromatografia em FLPC utilizando colunas de troca catiônica e interação hidrofóbica. A atividade enzimática ótima foi descrita como independente de Ca+2 e associada a uma proteína de 17 kDa (PAF-AH de T. infestans; PATi) em SDS-PAGE sob condições redutoras. Experimentos de espectrometria de massa sugerem que PATi é membro da família de fosfolipases A2. Anticorpos específicos localizaram a enzima nas glândulas salivares D2. Esses dados sugerem que a hidrólise de PAF pelo inseto possa interferir nas respostas anti-hemostática e/ou nociceptiva do hospedeiro. Com o objetivo de compreender melhor a complexidade bioquímica e farmacológica deste inseto, uma biblioteca de cDNA de suas glândulas salivares foi seqüenciada. Proteínas salivares também foram submetidas à eletroforese bidimensional seguida de análise por espectrometria de massa. Neste trabalho, nós apresentamos a análise de um grupo de 1534 seqüências de cDNA das glândulas salivares, das quais 645 codificam para proteínas putativamente secretadas. A maioria das proteínas salivares descritas como lipocalinas – 55% da biblioteca de cDNA – coincidiram com seqüências peptídicas dos resultados proteômicos. Esperamos que a obtenção desses novos transcritos salivares possa auxiliar no esclarecimento da função de moléculas salivares nas interações entre o vetor e o hospedeiro e na descoberta de novos agentes farmacológicos. / Triatoma infestans is one of the most important vectors of Chagas Disease in Latin America, feeding on vertebrate blood in all life stages. Hematophagous insects’ salivary glands produce potent pharmacological compounds that counteract host hemostasis, including anti-clotting, anti-platelet, and vasodilatory molecules. The saliva of T. infestans mediates hydrolysis of NDBC6HPC, a substrate for Platelet-activating factor-acetylhydrolase (PAF-AH), at neutral pH. Purification of this activity was achieved by a two-step FPLC procedure using cation exchange and hydrophobic columns. Optimal enzyme activity was found to be Ca+2-independent and associated with a single 17-kDa protein (PAF-AH of T. infestans; PATi) on SDS-PAGE under reducing conditions. Results from mass spectrometry experiments suggest that PATi is a member of the phospholipase A2 family. Specific antibodies localized the enzyme in the luminal content of the salivary glands D2. These findings suggest that hydrolysis of PAF may facilitate the insect to avoid host hemostatic and/or nociceptive responses. To obtain a further insight into the salivary biochemical and pharmacological complexity of this insect, a cDNA library was randomly sequenced. Also, salivary proteins were submitted to 2D gel electrophoresis followed by MS analysis. We present the analysis of a set of 1,534 salivary gland cDNA sequences, 645 of which coding for proteins of a putative secretory nature. Most salivary proteins described as lipocalins – 55% of the cDNA library – matched peptides sequences obtained from proteomic results. We expect this work will contribute with new salivary transcripts that could help the understanding of the role of salivary molecules in host/vector interactions and the discovery of novel pharmacologic agents.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/3231 |
| Date | 13 November 2007 |
| Creators | Assumpção, Teresa Cristina França de |
| Contributors | Santana, Jaime Martins de, Ribeiro, José Marcos |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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