Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Botânica, 2008. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-09-24T20:01:42Z
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Previous issue date: 2008 / O milho é uma cultura de grande importância econômica mundial. O amido
contido em seus grãos é altamente utilizado na nutrição humana, animal e na
indústria. O amido é composto de dois tipos de polímeros de glicose
estruturalmente diferentes, a amilose constituída por cadeia linear, conectadas por
ligações glicosílicas α-1,4 e a amilopectina com cadeia ramificada conectadas por
ligações glicosílicas α-1,4 e por pontos de ramificação α-1,6. A enzima de
ramificação do amido (Starch-Braching Enzyme - SBE) catalisa a formação de
ligações glicosílicas α-1,6, formando a estrutura da amilopectina. Em milho foram
identificadas três isoformas da enzima de ramificação, a SBE I, SBE IIa e SBE IIb.
O objetivo principal deste trabalho foi estudar o efeito do silenciamento do gene
sbe1 que codifica para a enzima de ramificação do amido I (SBE I) em milho e
monitorar as possíveis alterações na ausência da expressão do gene no amido da
semente. Para o silenciamento do gene sbe1 foi construído um vetor de RNA
interferente, que contém o gene bar como marcador de seleção. O plasmídeo foi
utilizado na transformação genética de calos embriogênicos de milho via
biobalística. Trinta plantas de milho geneticamente modificadas (R0) foram
geradas e caracterizadas. A ausência do gene sbe1 alterou o fenótipo dos grãos
de milho produzidos pelas plantas transgênicas deixando-os enrugados. A análise
protéica demonstrou que houve o silenciamento parcial do gene sbe1 no
endosperma transgênico. As sementes de milho geneticamente modificadas
demonstraram aumento da quantidade de glicose. _____________________________________________________________________________ ABSTRACT / Maize is a very important world-wide economic crop. The starch contained in its
grains is highly used in human nutrition, animal feeding and fuel industry. Starch is
composed of two types of structurally different glucose polymers: amylose,
constituted by linear chain, hardwired for glucosidic linkage α-1,4; and amylopectin
with glucosidic linkage α-1,4 and branchpoints α-1,6 ramified chains. The starch
branching enzyme (SBE) catalyzes the formation of glucosidic linkage α-1,6,
confering the amylopectin final structure. Three isoforms of the starch branching
enzyme have been identified in maize: SBE I, SBE IIa and SBE IIb. The main
objective of this work was to study the effect of starch branching enzyme I gene
(sbe1) silencing and to monitor the possible alterations in the absence of the
expression of the gene in the seeds. For inactivation of sbe1 gene a RNA
interfering vector containing the selection marker bar gene was constructed. The
vector was used to transform embryonic calli of maize via biobalistic method. Thirty
maize transgenic lines (R0) were generated and characterized. The sbe1 silencing
contributed to modify grains phenotype, resulting in wrinkled seeds in transgenic
plants. The analysis of protein accumulation levels in different transgenic tissues
demonstrated that SBE I was found in lower levels in transgenic endosperm when
compared to the same tissue in non-transgenic plants, suggesting that target gene
inactivation was carried out partial and efficiently in endosperm cells. In an
analogous way seed glucose content was increased in most of transgenic maize
lines.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/5782 |
| Date | January 2008 |
| Creators | Cipriano, Thaís de Moura |
| Contributors | Aragão, Francisco José Lima |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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