Orientadores: Maria Luiza Moretti, Angélica Zaninelli Schreiber / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T08:47:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2014 / Resumo: Introdução: os fungos do gênero Fusarium são ubíquos no meio ambiente e causam doenças em plantas e aos seres humanos. Objetivos: 1)estabelecer o protocolo para a coleta e o isolamento de Fusarium spp. no ar; 2)isolar fungos do gênero Fusarium do ar da enfermaria de Hematologia e da Unidade de Transplante de Medula Óssea (TMO) no Hospital de Clínicas (HC) da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) e comparar a relação genética de isolados ambientais de Fusarium spp. com os isolados a partir de hemoculturas de rotina diagnóstica de pacientes hospitalizados durante os anos de 2002 a 2013, 3)identificar os fungos do gênero Fusarium ao nível de complexo de espécies por PCR em tempo real, e ao nível de espécie pelo sequenciamento de fragmento do gene EF1?. Metodologia: foram colhidas amostras de ar nas unidades de TMO (que possui controle de ar através de filtros HEPA e fluxo de ar de pressão positiva) e na Hematologia (unidade sem controle do ar) do HC. De 2006 a 2013 foram identificados 18 isolados de Fusarium spp. em culturas de sangue. A coleta de ar foi realizada através do amostrador de ar BioSamp modelo MBS 1000D (YotsubishiCorp Japão). Um meio de cultura seletivo para Fusarium (Agar Komada com modificações) foi usado na placa de Petri dentro do amostrador de ar. O volume de ar de 1000 mL e 500 mL foram aspirados da Hematologia e enfermarias de TMO, respectivamente. Após o tempo de incubação, as colônias que cresceram nas placas foram avaliadas macroscopicamente e microscopicamente para identificação morfológica. Fusarium spp. foram identificados através de um novo ensaio de PCR em tempo real composto por dois ensaios de PCR em tempo real: um específico para o gênero Fusarium e um ensaio específico para detecção específica do complexo de espécies de Fusarium solani (FSSC). Para confirmar o complexo de espécies de Fusarium, uma região parcial do gene EF-1? foi sequenciado. O alinhamento das sequências foi realizado no programa Clustal W e a análise filogenética utilizou o programa Mega5 com o algorítimo Neighbor-Joininge Bootstrap de 1000 replicatas. Resultado: foram isoladas 108 cepas de Fusarium spp. destes 28% na unidade de TMO e 78% na Hematologia. Os complexos de espécies encontrados foram: 10% FCSC, 21% FIESC, 1% FOSC, 12% FSSC, 51% GFSC e 5% não definido. Na TMO a maior prevalência foi da espécie Fusarium solani (9/30 isolados) e na Hematologia Fusarium verticillioides (25/31 isolados). Não foi possível constatar relevância entre a temperatura e umidade do ar em relação ao aumento ou diminuição de isolados nas coletas. Nove isolados FSSC do ar e 8 de sangue apresentaram BT 99%. Conclusão. Os dados de análise filogenética sugeriram que os isolados de sangue de pacientes e ambientais foram similares sugerindo que o ambiente pôde representar uma fonte potencial de infecção para os pacientes imunodeprimidos / Abstract: Introduction:the fungus Fusarium are ubiquitous in the environment and cause diseases in plants and humans. Objectives: isolate fungi Fusarium in the air of the ward Hematology and Unit of Bone Marrow Transplantation (BMT) at the Hospital de Clinicas (HC), State University of Campinas (UNICAMP), compare the phylogenetic relationship of environmental isolates of Fusarium spp .with isolates from blood cultures of routine diagnosis of hospitalized patients during the years 2002-2013, to establish protocol for the collection and isolation of Fusarium spp. in the air, identify the fungi Fusarium species complex level by real time PCR, and to species level by sequencing the fragment EF1 ? gene. Methodology: air sample was collected in BMT units (which has control of air through HEPA filters and air flow positive pressure) and Hematology (there is not self control air inlet) HC. From 2006 to 2013, 18 samples obtained from blood cultures with the presence of Fusarium spp. were added to study the relationship between degree of molecular clinical isolates isolated from the air. The air sampling was performed using the Bio air sampler Samp MBS model 1000D (Yotsubishi Corp. Japan). A selective medium for Fusarium (Komada Agar changes by Y. Mikami, Chiba University) was used in the petri dish in the air sampler. The air volume of 1000 mL and 500 mL were aspirated Hematology and BMT wards, respectively. After the incubation time, colonies that grew on the plates were evaluated macroscopically and microscopically for morphological identification. Fusarium spp. were identified by PCR of a new system in real time according to Muraosa et al. comprising two PCR assays in real time: the specific assay Fusarium and a specific assay for specific detection of Fusarium solani (FSSC) complex. To confirm the complex of Fusarium species, a partial region of the EF-1? gene was sequenced. The alignment of sequences was performed in Clustal W program and phylogenetic analysis used Mega5 program with the neighbor-joining algorithm and bootstrap 1000 replicates. Results: 108 ceepas Fusarium spp were isolated. 28% of these isolates form the BMT unit and 78% in Hematology. Overall the species complexes ficarm divided as follows: 10% FCSC, 21% FIESC 1% FOSC, FSSC 12%, 51% and 5% GFSC nd not defined). In the BMT was higher prevalence of the species Fusariu solani (9/30 isolates) and the Hematology espéciecom largest presence is Fusarium verticillioides (25/31 isolates). Unable to find relevance between temperature and air humidity in relation to the increase or decrease in collections of isolates. Nine isolates of Fusarium solani air obtained from the same source ancestras 8 Fusarium solani isolates from blood (BT 99%). Conclusion:Fusarium spp were isolated in 108 environmental samples en all evaluated environments. Phylogenetically findings suggest equivalence between environmental isolates and isolates from the blood of patients. The collection protocol set showed satisfactory for the specific isolation of Fusarium result. The findings of Fusarium were grouped into complexes FSSC and FSSC not the technique of real-time PCR and sequencing of the gene EF1? allowed to classify the isolates in the species level / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Ciências
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unicamp.br:REPOSIP/311063 |
| Date | 27 August 2018 |
| Creators | Moraes, José Renato de, 1976- |
| Contributors | UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS, Schreiber, Angélica Zaninelli, 1965-, Moretti, Maria Luiza, 1953-, Ramos, Marcelo de Carvalho, Martinez, Roberto |
| Publisher | [s.n.], Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Clínica Médica |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 64 f. : il., application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da Unicamp, instname:Universidade Estadual de Campinas, instacron:UNICAMP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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