Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-23T02:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 1997 / Resumo: A insulina, ao se ligar à subunidade a. de seu receptor heterotetramérico, dá inicio à uma série de ações imediatas e tardias, metabólicas e promotoras de crescimento. Tais eventos ocorrem através da estimulação da subunidade J3 transmembrana do receptor, que se autofosforila e ativa a fosforilação de substratos endógenos intracelulares, dos quais o mais estudado é o IRS-1. Esta proteína de peso molecular 185 kDa pode ser bem caracterizada como um substrato direto do receptor de insulina e quando fosforilada se associa à enzima fosfatidilinositol 3-quinase, ativando-a. Utilizando-se técnicas de immunoblotting com anticorpos anti-receptor de insulina, anti-IRS-1, antifosfotirosina e anti-PI 3-quinase é possível analisar o grau de fosforilação do receptor de insulina, da pp 185, do IRS-l, a concentração destas proteínas e a associação do IRS-1 com a PI 3-quinase, ou seja, as ações iniciais da insulina. Neste estudo investigamos estas três etapas da atividade insulínica no tecido adiposo em quatro modelos animais de resistência à insulina: o jejum prolongado, o envelhecimento, o uso agudo de adrenalina e o uso crônico de dexametasona. Foram utilizadas as técnicas de immunoblotting de extratos totais e de imunoprecipitação com anticorpos específicos. Os resultados demonstram que em todas as situações estudadas foram observadas reduções no grau de fosforilação do receptor de insulina, da pp185, do IRS-1 e na associação IRS-1/PI 3-K. É interessante ressaltar que nos animais idosos, além da redução no grau de fosforilação destas proteínas, houve uma diminuição marcante nos níveis protéicos do receptor de insulina e do IRS-1. Com exceção do jejum prolongado, os resultados obtidos são sinú1ares aos encontrados em tecidos hepático, muscular e renal. Tais achados sugerem que a regulação das ações insulínicas seja específica não somente em cada situação avaliada mas também em cada tecido. Outro dado importante deste estudo foi o encontro de uma proteína de peso molecular de 60 kDa, que se encontra fosforilada após o estímulo com insulina, de maneira semelhante ao receptor e à pp185 e que até o momento só tem sido evidenciada no tecido adiposo / Abstract: Insulin stimulates the tyrosine kinase activity of it' s receptor resulting in the phosphorylation of it' s cytosolic substrate, insulin receptor substrate 1 (IRS-l), which in tum associates with and activates PI 3-kinase. Using antipeptide antibodies to insulin receptor, to pp 185, to IRS-l, to PI 3-kinase and antiphosphotyrosine antibodies it is possible to study insulin-stimulated receptor autophosphorylation, pp 185 or IRS-l phosphorylation and the associationlactivation IRS-l/PI 3-kinase. It's also possible to quantify the leveI ofinsulin receptor and IRS-l. In the present study we have exa.min,ed this three early steps of insulin action in adipose tissue in four animal models of insulin resistance: 72 hours fasting (hipoinsWinemia), aging and effect of chronic treatment with dexametasone (hiperinsulinemia) and the effect of acute epinephrine treatment (normoinsulinemia). We use immunoblotting technics of total extracts and immunoprecipitates with specific antibodies. Fasting showed a deqrease in insulin receptor, IRS-l, pp 185 and pp 60 phosphorylation to 64 +/- 8% (p<0,05), 45 +/- 90,/0 (p<0,001), 40+/- 6% (p<0,001) and 17+/- 8% (p< 0,05), respectively. The IRS-l/ PI 3-K association was also decreased to 61'+/-13% (p<0,05). In old rats (20 months) we observed a decrease in IR and IRS-l protein levels to 8 +/- 3% (p<0,05) and 11 +/- 4% (p<0,05). There was a simultaneous decrease in IR, pp 185, IRS-l and pp 60 phosphorylation, after insulin stimulation, to 73 +/- 6% (p<0,05), 38+/-5% ~p<O,OOI), 20% and 64 +/- 10% (p<0,05), respectively. In the group of rats treated acutely with epinephrine our results demontrated also a decrease in the early events ef insulin action, mostly in protein phosphorylation , showing reductions to 60 :t 9% (p<0,05) in IR autophosphorylation, to 38 :t 9% (p<0,05) in pp 185 phosphorylation, to 50% in pp 60 phosphorylation and to 37 :t 3% (p<0,05) in IRS-l phosphorylation. IRS-l/PI 3-K interaction was reduced to 55% in this group. Finnaly, chronic (6 days) dexametasone treatment promoted a decrease in IR, pp 185, pp 60 and IRS-l phosphorylation levels to 61 :t 10% (p<0,001), 51 :t 8% (p<0,05), 50 :t 6% (p<0,05). These findings differs from other studies in hepatic, renal and muscular tissues, where in fasting there is an increase in this phase of insulin action, suggesting that the regulation of this early steps should be specific for each situation and tissue. Another important finding of this work is the evidence of a 60 kDa protein, phosphorylated after insulin stimulation, in a similar way to the receptor and it' s substrate. This protein is observed only in adipose tissue until the moment, was recently cloned and is now called IRS-3 / Doutorado / Medicina Interna / Doutor em Medicina
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unicamp.br:REPOSIP/311217 |
| Date | 17 December 1997 |
| Creators | Carvalho, Olga Maria Fernandes de, 1953- |
| Contributors | UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS, Saad, Mario José Abdalla, 1956- |
| Publisher | [s.n.], Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Medicina |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 117f. : il., application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da Unicamp, instname:Universidade Estadual de Campinas, instacron:UNICAMP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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