Orientadores: Jose Mauro Granjeiro, Eulazio Mikio Taga / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T22:51:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2002 / Resumo: A arilsulfatase A de parótida bovina foi purificada 6.614 vezes, até homogeneidade, através de fracionamento com sulfato de amônio, precipitação ácida, precipitação cetônica, cromatografia de troca iônica (DEAE-Sephadex A50) e cromatografia de exclusão molecular (Sephacryl S-200). O rendimento obtido foi de 35,1% e a atividade específica foi de 79,4 UElmg. A pureza da enzima foi comprovada através de eletroforese em condição nativa (PAGE) e desnaturante (SDS-PAGE), e cromatografia de exclusão molecular (Sephacryl S-200). Como determinado através de filtração em gel e SDS-PAGE, a enzima apresentou uma Mr de 135,0 e 60,5 kDa, respectivamente. Os estudos cinéticos demonstraram que a temperatura ótima para a enzima é de 40°C e que a 70°C e 20°C, existia atividade enzimática residual de 28,5% e 44,0 %, respectivamente. Quanto ao pH ótimo, foi observado um platô entre o pH 4,5 e o pH 5,5. A KM obtida para o p-NCS foi de 1,1 mmol L-1, a VMax 241,6 IJmol min-1, a constante catalítica 806,0 S-1 e a energia de ativação 13,583 kcal rroI-1. A enzima foi fortemente inibida por prata (Ki 0,4x10-6 moi L-1) e fosfato (Ki 2,95x10-6 moi L-1), mas insensível ao bário, chumbo, cl o reto , nitrato e sulfato / Abstract: Arylsulfatase A from bovine parotid was purified 6,614-fold to homogeneity, by procedures involving ammonium sulfate fractionation, acid treatment, acetone preciptation, DEAE-Sephadex ion-exchange chromatography and Sephacryl S-200 gel filtration. The enzyme recovery was 35.1 % and specific activity 79.4 units per mg protein. The following homogeneity criteria were used: PAGE, SDS-PAGE and gel filtration on Sephacryl-S200. The relative molecular mass of 135.0 (dimer) and 60.5 kDa (monomer) were determined by gel filtration chromatography and SDSPAGE, respectively. Kinectic studies showed an optimum temperature of 40° C, and a broad optimum pH between 4.5-5.5. The I<M value of 1.1 mmol L -1 was obtained, a VMax 241.6 IJmol L-1, and kcat 806.0 S-1 for p-NCS and activation energy 13.583 kcal mor1. The enzyme was inhibited by silver (Ki 0.4x10-6 moi L-1) and phosphate (Ki 2.95x10-6 moi L-1) but was not inhibited by barium, lead, nitrate and sulfate / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unicamp.br:REPOSIP/314395 |
| Date | 17 July 2002 |
| Creators | Nakamune, Ana Claudia de Melo Stevanato |
| Contributors | UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS, Taga, Eulazio Mikio, Granjeiro, Jose Mauro, Sassaki, Kikue Takebayashi, Ciancaglini, Pietro, Ogo, Satie Hatsushika, Marangoni, Sérgio |
| Publisher | [s.n.], Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 79p. : il., application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da Unicamp, instname:Universidade Estadual de Campinas, instacron:UNICAMP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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