Made available in DSpace on 2016-04-04T12:40:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2
michelle_machado_ioc_mest_2014.pdf: 6230482 bytes, checksum: fd56019db1296559466fdb14552694e1 (MD5)
license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)
Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / As leishmanioses são um grupo de doenças causadas por diversas espécies de protozoários do gênero Leishmania, clinicamente classificadas como leishmaniose tegumentar e leishmaniose visceral. As leishmanioses representam um grave problema de saúde pública no Brasil, onde já foram registradas em todos os estados. Considerando que os mecanismos pelos quais as diferentes espécies de Leishmania causam diferentes patologias ainda são amplamente desconhecidos, pretendeu-se caracterizar diferenças no perfil de citocinas e quimiocinas produzido por macrófagos murinos infectados com L. (Leishmania) amazonensis e L. (Viannia) braziliensis, espécies causadoras de leishmaniose tegumentar americana no Brasil e investigar uma possível relação entre os resultados deste trabalho e as características imunopatológicas das infecções com as espécies em estudo. Macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c foram infectados com diferentes cepas de L. (L.) amazonensis e de L. (V.) braziliensis. A carga parasitária e a taxa de infecção de macrófagos foram determinadas através de microscopia ótica. As cepas de L. (L.) amazonensis apresentaram uma maior variabilidade intraespecífica do que as de L. (V.) braziliensis, porém sem diferença estatisticamente significante
A produção de NO foi avaliada por meio da reação de Griess. Todas as cepas de L. (L.) amazonensis induziram a produção de NO, enquanto que apenas na infecção por uma cepa de L. (V.) braziliensis observaram-se níveis detectáveis de NO. Entretanto, esta aparente diferença também não foi estatisticamente significante. A produção de ureia foi determinada através da ocorrência da reação de hidrólise de L-arginina pela enzima arginase. Observou-se que a produção de ureia nas culturas infectadas por L. (V.) braziliensis foi mais heterogênea do que nas infectadas por L. (L.) amazonensis. Observou-se também uma correlação inversa forte e significativa (Spearman r = -0,8051; p = 0,0218) entre os níveis de nitrito e de uréia caracterizando as duas vias de ativação macrofágica: clássica e alternativa, respectivamente. Citocinas e quimiocinas foram dosados nos sobrenadantes dos macrófagos infectados através da técnica de Luminex e a avaliação da expressão gênica destas citocinas e quimiocinas foi realizada por meio do PCR Multiplex em tempo real. Observaram-se importantes diferenças entre o perfil de citocinas e quimiocinas caracterizados através de Luminex e de PCR Multiplex em tempo real
Apesar disso, ambos os métodos mostraram níveis mais altos de citocinas e quimiocinas nas culturas infectadas com L. (V.) braziliensis em comparação às infectadas com L. (L.) amazonensis. Os resultados do Multiplex mostraram ausência de diferença estatística entre os macrófagos infectados por L. (L.) amazonensis e o controle de macrófagos não infectados. Por outro lado, nas culturas infectadas por L. (V.) braziliensis houve um aumento significativo (p < 0,05) da expressão gênica das citocinas IL-1\03B1, IL-6, G-CSF e da enzima NOS, além do aumento sugestivo (p<0,1) da expressão da citocina IL-10, da quimiocina CCL3 e dos receptores de quimiocinas CCR2 e CCR5. Concluiu-se, portanto, que a infecção por L. (V.) braziliensis modulou uma resposta predominantemente pró-inflamatória nos macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c, enquanto que não foi observada alteração na expressão de qualquer dos genes alvos do estudo na infecção com a espécie L. (L.) amazonensis em relação às culturas controle não infectadas / Leishmaniasis is a group of diseases caused by vari
ous species of protozoa of the
genus
Leishmania
, clinically classified as cutaneous leishmaniasis
and visceral
leishmaniasis. Leishmaniasis represents a serious p
ublic health problem in Brazil,
where the desease has been registered in all states
. Whereas the mechanisms by
which the different species of
Leishmania
cause different diseases are still largely
unknown, we sought to characterize differences in t
he profile of cytokines and
chemokines produced by murine macrophages infected
with
L. (Leishmania)
amazonensis
and
L. (Viannia) braziliensis
species, both of them causing American
cutaneous leishmaniasis in Brazil, and to investiga
te a possible relationship between
the results of this work and the immunopathological
characteristics of the infections
with these species. Peritoneal macrophages from BAL
B/c mice were infected with
different
L. (L.) amazonensis
and
L. (V.) braziliensis
strains. The parasite load and
the infection rate of macrophages were determined b
y optical microscopy. The
L. (L.)
amazonensis
strains apparently showed greater intraspecific va
riability than those of
L. (V.) braziliensis
, although no statistically significant difference
was found. NO
production was assessed by the Griess reaction. All
strains of
L. (L.) amazonensis
induced NO production while detectable NO levels we
re observed only in the
infection by one strain of
L. (V.) braziliensis
. However, this apparent difference was
not statistically significant. The urea production
was determined by the occurrence of
the hydrolysis reaction of L-arginine by the enzyme
arginase. It was observed that
urea production in cultures infected by
L. (V.) braziliensis
was more heterogeneous
than in those infected by
L. (L.) amazonensis
. We also observed a strong and
significant inverse correlation (Spearman r = -0.80
51, p = 0.0218) between the levels
of nitrite and urea featuring the two routes of mac
rophage activation: classical and
alternative, respectively. Cytokines and chemokines
were measured in the
supernatants of infected macrophages through the Lu
minex technique and the
assessment of gene expression of these cytokines an
d chemokines was performed
using real-time PCR Multiplex. Important difference
s were observed between the
profile of cytokines and chemokines revealed by Lum
inex and real-time PCR
Multiplex. Nevertheless, both methods showed higher
levels of cytokines and
chemokines in cultures infected with
L. (V.) braziliensis
as compared to those
infected with
L. (L.) amazonensis
. The Multiplex results showed no statistical
difference between macrophages infected with
L. (L.) amazonensis
and uninfected
macrophages control. On the other hand, in cultures
infected with
L. (V.) braziliensis xii
there was a significant increase (p<0.05) of gene e
xpression of IL-1
α
, IL-6, G-CSF
cytokines and NOS enzyme, and also a suggestive inc
rease (p < 0.1) of the
expression of the cytokine IL-10, the chemokine CCL
3 and CCR2 and the chemokine
receptors CCR5. Therefore, it was concluded that in
fection with
L. (V.) braziliensis
modulated a response predominantly proinflammatory
in peritoneal macrophages
from BALB/c mice, whereas no change was observed in
the expression of any target
gene in infections with
L. (L.) amazonensis
when compared to uninfected control
cultures
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/13501 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Machado, Michelle Menezes |
| Contributors | Alves, Carlos Roberto, Silva, Adriano Gomes, Amaral, Veronica Figueiredo do, Souza, Celeste da Silva Freitas de, Cândido, Jussara Lagrota, Mendonça, Sérgio Coutinho Furtado de |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0029 seconds