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Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O Eritema Nodoso Hansênico (ENH) consiste no estado de emergência mais importante da hanseníase e representa a principal causa de internações, acometendo a pele e muitos outros órgãos. A presença de infiltrados contendo células polimorfonucleares é frequentemente comum para este tipo de reação e está relacionada com o aumento da inflamação. Uma das características com o ENH é a resposta clínica ao tratamento com Talidomida (Tal), acompanhada por uma significativa redução no número de neutrófilos nas lesões e redução de citocinas pró-inflamatórias. Objetivo: Identificar o perfil de expressão gênica das lesões ENH, antes e após o tratamento com a Talidomida, em busca de um melhor entendimento dos mecanismos imunopatogênicos e quais alvos moleculares são modulados pela Talidomida. Materiais e Métodos: Biópsias da lesão de pele foram obtidas de quatro pacientes no momento do diagnóstico do ENH e 7 dias após tratamento com Tal e submetidas a análise de microarranjo. A partir desses resultados, os alvos moleculares foram selecionados para a validação, em novas biópsias de lesão de pele obtidas de dez novos pacientes, por RT-PCR em tempo real, western blotting (WB) e imunohistoquímica (IH)
Resultados: Dentre os processos biológicos identificados na análise do microarranjo, os de maior significância estatística foram o de resposta imune e ferimentos. Para validação por RT-PCR em tempo real foram selecionados genes correlacionados a imunopatologia do ENH. A análise da expressão gênica mostrou um redução dos níveis de RNAm de TNC; VCAM1; THBS1; ADAM12; MMP1; Cyr61; CASP1; CD16 nas lesões ENH tratadas com Talidomida em comparação com o grupo ENH. As análises por WB e IH das lesões ENH revelaram que a expressão proteica da TNC, PTX3 e CD16a foram globalmente reduzidas nas lesões após o tratamento com Tal. Conclusão: Em resumo, nossos dados sugerem relevância clínica dos alvos moleculares (TNC, PTX3 e CD16a) na patogênese da injúria tecidual da hanseníase estudados no contexto da Talidomida, uma droga eficaz para o tratamento do ENH e responsável pela redução significativa do infiltrado neutrofílico. Dessa forma, nossos estudos indicam que a Talidomida pode modular negativamente a injúria através da diminuição da expressão de TNC que é altamente expressa durante os processos de cicatrização de feridas e inflamação; PTX3, um importante marcador de inflamação vascular; e CD16a expresso em neutrófilos e que reconhecem imunocomplexos / Erythema nodosum leprosum (ENL) is the most important critical state of leprosy and is the leading cause of hospitalization, affecting the skin and many other organs. The presence of infiltrates containing polymorphonuclear cells is frequently common for this type of reaction and is related to increased inflammation. One of ENL\2019s characteristics is the clinical response to treatment with Thalidomide (Thal), accompanied by a significant reduction in the number of neutrophils in lesions and pro-inflammatory cytokines. Objective: To identify the gene expression profile of ENL lesions before and after treatment with Thalidomide in search of a better understanding of immunopathogenic mechanisms and molecular targets which are modulated by Thalidomide. Materials and Methods: Biopsies of skin lesion were obtained of four patients at the time of being diagnosed with ENL and 7 days after treatment with Thalidomide, and subjected to microarray. From these results, the molecular targets were selected for validation in new biopsies of skin lesion obtained from ten new patients, by real time RT-PCR, western blotting (WB) and immunohistochemistry (IH)
Results: Among the biological processes identified in the analysis of microarray, those with the highest statistical significance were the immune response and injury response. Genes correlated with immunopathology of ENL were selected for validation by real time RT-PCR. The analysis of gene expression showed reduction in levels of mRNA of TNC; VCAM1; THBS1; ADAM12; MMP1; Cyr61; CASP1; CD16 in ENL lesions treated with Thalidomide in comparison with the ENL group. The IH and WB analysis of ENL lesions revealed that the protein expressions of TNC, PTX3 and CD16a were globally reduced in tissue lesions after treatment with Thal. Conclusion: In summary, our data suggests clinical relevance of molecular targets (TNC PTX3 and CD16a) in the pathogenesis of tissue injury of leprosy studied in the context of Thalidomide, an effective drug for the treatment of ENL and responsible for a significant reduction in the neutrophil infiltration. Thus, our studies indicate that Thalidomide can modulate negatively to injury by decreasing the TNC expression that is highly expressed during the healing of wounds and inflammation; PTX3, an important marker of vascular inflammation; and CD16a expressed in neutrophils and recognizing immunocomplexes
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/14292 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Mendes, Mayara Abud |
| Contributors | Pereira, Verônica Schmitz, Britto, Constança, Durães, Sandra, Salles, Anna Maria, Esquenazi, Danuza, Sarno, Euzenir Nunes |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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