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Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Para testar a atividade biológica do interferon beta (INF-β) no tratamento da esclerose múltipla (EM), é importante que se tenha um modelo animal. Como a infecção pelo vírus da encefalomielite murina de Theiler (do inglês TMEV – Theiler’s Murine Encephalomyelitis Vírus) é capaz de evoluir para uma lesão desmielinizantesimilar a da EM em humanos, este estudo se propõe a estabelecer os parâmetros para avaliar a infecção do TMEV em culturas de
células de rim de hamster neonato (do inglês BHK-21– Baby hamster kidney cells). Para
tanto foi necessário adaptar a amostra viral TMEV BeAn à cultura BHK-21, estabelecer um
ensaio de RT-PCR e padronizar um PCR em tempo real.Também foi construido um vetor
plasmidial contendo o gen L* do TMEV para expressãotransitoria em células HEK-293-T e
esta construção plasmidial foi utilizada para obtenção de um soro policlonal anti-L*
utilizando a metodologia de imunização genética. Como resultados foram obtidos estoques virais de células BHK-21 infectadas pelo TMEV e parte destes estoques foram avaliados quanto à presença de moléculas genômica TMEV, indicativa de replicação viral, por ensaios de RT-PCR e quantificação por PCR em tempo real. Asregiões do genoma do TMEV 3A3B e L* foram aquelas que forneceram melhores resultadosnesta avaliação genômica quantitativa,
que deverá ser aplicada para todos os estoques TMEVBHK-21 que foram obtidos. O vetor plasmidial de expressão células HEK-293-T pcDNA4His/Max contendo o gene L* expressou com sucesso transitoriamente esta proteína heteróloga, porém não foi capaz de induzir a formação de anticorpos policlonais anti-L* em coelhos, através da técnica de imunização genética. / In order to evaluate the biologic activity of the therapeutic drug beta interferon to
multiple sclerosis, an adequate animal model is necessary.inthis aspect the infection of murine encephalomyelitis virus can evolve to desmielinization that is very similar to human’s multiple sclerosis, the proposal of this study was the establishment of parameters to evaluate the TMEV infection in baby hamster kidney cells-BHK-21. Toward that objective was adapted the TMEV BeAn prototype sample to BHK-21 and also was established a RT-PCR and a real time PCR. Additionally, it was constructed a plasmid vector containing the L* gene of TMEV, for the expression in HEK-293-T cells. This plasmid vector was evaluated in the
capacity to produce anti-L* antibodies by genetic immunization. It was possible to obtain stocks of BHK-21 TMEV infected and some of these contents were evaluated as of the quantity of genomic molecules of TMEV as an indicative of viral replication, by RT-PCR and real time PCR. The TMEV genomic regions 3A3B and L*provided best results in the quantitative evaluation. In thefuture, the real time PCR could be used to
evaluate all the stocks that were produced. The plasmidial vector pcDNA4His/Max
containing the L* gene was able to transiently express the L* protein, but unfortunately, it was not able to induce anti-L* in rabbits.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/5827 |
| Date | January 2009 |
| Creators | Velloso, Álvaro Jorge |
| Contributors | Garcia, Rita de Cassia Nasser Cubel, Galler, Ricardo, Pinto, Marcelo Alves, Moraes e Souza, Márcia Terezinha Baroni de |
| Publisher | Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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