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Previous issue date: 2014-05-06 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Cryptococcus neoformans (C. n) e Cryptococcus gattii (C. g) são agentes da criptococose. A carência de publicações sobre teste de suscetibilidade de C. n e principalmente de C. g é evidente. A maioria de isolados clínicos de C. g mostra-se suscetível in vitro a fluconazol e itraconazol; no entanto o surgimento de resistência a drogas antifúngicas incentivou os testes de suscetibilidade in vitro. Como conseqüência, Clinical and Laboratory Standadards Institute \2013 CLSI, anteriormente National Committee for Clinical Laboratory Standards \2013 NCCLS, publicaram metodologia padronizada M27-A2 para alcançar reprodutibilidade e permitir a comparação de resultados de suscetibilidade entre laboratórios, porém alguns problemas como o tempo de incubação e o padrão de leitura levaram à busca de técnicas alternativas, tais como a citometria de fluxo. O objetivo deste trabalho é padronizar a técnica de citometria de fluxo para o teste de suscetibilidade in vitro de C.n e C.g. visando a redução do tempo de incubação, a utilização de leitura automatizada e a obtenção de resultados rápidos e reprodutíveis
A concentração inibitória mínima (CIM) de 20 isolados de C.n e 21 de C.g foi determinada por citometria de fluxo e os resultados comparados com o protocolo padrão proposto pelo CLSI/M27A-2. Após duas horas de incubação com anfotericina B utilizando FUN-1, C. gattii resultou em 100% de concordância entre as duas técnicas para diluição de 2\03BCg/mL e 95,2% para 1\03BCg/mL e C. neoformans resultou em 100% de concordância para 1 e 2\03BCg/mL. Para azólicos e flucitosina, foram obtidos resultados reprodutíveis com o fluorocromo Acridine Orange após 18 horas de incubação, que resultou em 78% de concordância entre as duas técnicas para fluconazol, 85% para itraconazol e 97% para flucitosina. Em ambas as metodologias, C. gattii foi menos suscetível do que C. neoformans frente ao itraconazol e flucitosina (p<0,05). A citometria de fluxo é uma ferramenta útil, com potencial para testes in vitro e determinação da CIM dos antifúngicos estudados, com apreciável redução do tempo mínimo para obtenção de resultados / Cr
yptococcus neoformans
(
C.n
) and
Cryptococcus gattii
(
C.g
) are the agents of cryptococcosis.
The lack of publications on susceptibility tests of
C.n
and especially
C.g
is evident. Most clinical
isolates of
C.g
proved to be susceptible
in vitro
to fluconazol
e and itraconazole and yet the
emergence of resistance to antifungal drugs encouraged susceptibility testing
in vitro
. As a
consequence,
Clinical and Laboratory Standadards Institute
–
CLSI
(
National Committee for
Clinical Laboratory Standards
–
NCCLS
)
pub
lished standardized methodology to achieve
reproducibility and allow comparison of susceptibility results between laboratories
(M27
-
A2
document)
, however some problems of methodology, like incubation time and standard reading,
led to the search for alterna
tive techniques, such as flow cytometry. The objective of this work is
to standardize the technique of flow cytometry to test the
in vitro
susceptibility of
C
.
n
and
C
.
g
in
order to reduce the incubation time, use of automated reading and
obtain
fast and re
producible
results
. The minimum inhibitory concentration (MIC) of 20 isolates of
C.n
and 21 of
C.g
was
determined by flow cytometry and the results compared with the standard protocol proposed by
CLSI/M27A
-
2.
Flow citometry showed 100% agreement with CLSI/
M27A
-
2 results for 2
μ
g/mL
and 95.2% for 1
μ
g/mL dilution when
C.g
isolates were tested, and 100% agreement for 1 and
2
μ
g/ml dilution when
C.n
were tested
after two hours of incubation with amphotericin B using
FUN
-
1
.
Reproducible results were obtained with fluorochrome Acridin
e Orange for azoles and
flucytosine after 18 hours incubation, resulting in 78% agreement for fluconazole, 85% for
itraconazole and 97% for flucytosine.
C.g
was less susceptible than
C.n
against itraconazole and
flucytosine (p <0.05) in both methodologies.
Flow cytometry is a useful tool, with potential for
in
vitro
susceptibility test
s
of the antifungal agents studied, with appreciable reduction in the
minimum time for achieving results.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/8168 |
| Date | January 2009 |
| Creators | Morales, Bernardina Penarrieta |
| Contributors | Fracalanzza, Sergio Eduardo Longo, Neufeld, Paulo Murillo, Igreja, Ricardo Pereira, Horn, Cynthia, Lazéra, Márcia dos Santos, Trilles, Luciana |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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