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Estudo do receptor LILRA2 na maturação e produção de citocinas por células dendríticas e se envolvimento na hanseníase

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Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os receptores da família LILR (Leukocyte Immunoglobulin- like Receptor) pertencem à superfarm1ia .das imunoglobulinas e são expressos em células de origem mielóide e linfóide. Os receptores inibidores (LILRB) apresentam longos domínios citoplasmáticos contendo de 2 a 4 domínios ITIM e são capazes de inibir ativação celular recrutando proteínas tirosinas fosfatases SHP-I. Já os receptores ativadores (LILRA) apresentam curto domínio citoplamático mas após associação com a cadeia gama do receptor Fc, que apresenta domínio ITAM, são capazes de transduzir sinais estimulatórios às células. Já foi demonstrado que LILRB I e LILRB2 podem inibir a citotoxidade de células NK e aumentar o limite de ativação de linfócitos T. Pouco se sabe a respeito da função dos receptores ativadores. No entanto. foi observado que LILRA2 estava com a expressão gênica aumentada nas lesões dos pacientes de hanseníase do polo lepromatoso. A função deste receptor foi investigada e os possíveis efeitos do Mycobacterium leprae sobre a ativação induzida por LILRA2 avaliados
Foram realizados experimentos de "cross-linking" em células dendríticas derivadas de monócitos (MDDC). Inicialmente, foi observado que após a estimulação àtravés de LILRA2 ocorria aumento no conteúdo de proteínas tirosina fosforiladas, sugerindo haver transdução de sinal. Também foi observado que as MDDC estimuladas via LILRA2 apresentavam marcadores de ativação celular, como a expressão de CD83, aumento na expressão de moléculas co-estimulatórias e do MHC. Foi observado ainda que a ativação de LILRA2 não induz a secreção de níveis significativos das citocinas. No entanto, um forte efeito sinergístico na secreção de TNF e IL-IO pode ser observado quando as células eram estimuladas via LILRA2 e TLR4 ou CD40. Foi observado ainda que após o "cross-linking", as MDDC apresentam forte capacidade aloestimulatória. A presencade células LILRA2+ CD68+ nas lesões dos pacientes lepromatosos foi detectada utilizando microscopia confocal. Nos experimentos subseqüentes foi avaliado se o M. leprae ativaria as MDDC e modularia a ativação induzida por LILRA2. Inicialmente observamos que as MDDC estimuladas com M. tuberculosis, mas não com M. leprae, secretam TNF
Baixas concentrações de IL-IO foram encontradas nas culturas estimuladas com M. leprae quando comparadas às culturas estimuladas com M tuberculosis. E ainda, o M. tuberculosis, mas não o M. leprae, teve efeito sinergístico com LILRA2 na produção de TNF. Na tentativa de encontrar o ligante deste receptor, foi gerado um tetrâmero e sua ligação a diversos tipos celulares foi testada. Interação do tetrâmero com monócitos estimulados com IL-4 e também MDDC foi detectada. Embora experimentos de imunoprecipitação tenham sido realizados, o ligante não foi encontrado. Até o momento, já observamos que a LILRA2 pode favorecer a maturação de MDDC, pelo menos in vitro, e contribuir para aumentada produção de citocinas. O M. leprae não parece ser um potente ativador das células dendríticas e ainda pode limitar a ativação induzida por outros receptores. A elevada expressão de moléculas coestimulatórias, a presença de IL-I O e ausência de IL-12 nas MDDC estimuladas com M. leprae ou via LILRA2 sugere que estes podem estar envolvidos na indução de tolerância observada nos pacientes lepromatosos / LILR (Leukocyte Immunoglobulin- like Receptor) are
a family of receptors from the
immunoglobulin superfamily expressed on myeloid and
lymphoid cells. LILR are characterized
by either 2 or 4 homologous Immunoglobulin-like dom
ais. One subset of receptors, LILRB,
displays long citoplasmatic tails containing immuno
receptor tyrosine-based inhibitory motifs
(ITIM). These receptors inhibit cell activation by
recruiting protein tyrosine phosphatase SHP-1.
Another subset of receptors, LILRA, contains short
cytoplasmatic domain that lack recognizable
docking motifs for signalling mediators. These rece
ptors associate with the gamma chain of the
Fc receptor, which transduces stimulatory signals b
y recruiting protein tyrosine kinases through a
cytoplasmatic immunoreceptor tyrosine-based activat
ion motif (ITAM). A third subset of
receptors has no transmembrane domain and is secret
ed as a soluble receptor. Some of these
receptors, LILRB1 and LILRB2, are specific receptor
s for MHC class I molecules. LILRBs have
been shown to inhibit cell activation in several ex
perimental systems. Little is know about the
activating receptors. LILRA2 was found to be up-reg
ulated in lesions of lepromatous leprosy
patients. In order to clarify whether this receptor
might influence the immune response in leprosy,
the function of this receptor was investigated. Cro
ss-linking of LILRA2 on dendritic cell (DC)
caused an up-regulation on protein tyrosine phospho
rylation, suggesting LILRA2 stimulates
intracellular signaling. Upon cross-linking, DC exp
ress high levels of MHC I and II and co-
stimulatory molecules, but cytokines were not detec
ted on culture supernatant. However, a strong
synergistic effect on TNF and IL-10 production was
observed when cells were simultaneously
stimulated by LILRA2 and TLR4 or CD40. LILRA2 activ
ated DC also induced allogeneic T
lymphocytes proliferation. By double immunofluoresc
ence labeling, it was identified that
LILRA2 is expressed on macrophage-like CD68+cells i
n lepromatous leprosy skin lesions. The
capacity of
M. leprae
to induce DC activation and/or to modulate LILRA2-
induced activation was
further investigated. In functional experiments it
was observed that M. tuberculosis but not
M.
leprae
stimulated cells induce TNF secretion. IL-10 was d
etected on
M. leprae
-stimulated
cultures, albeit at lower level than that of
M. tuberculosis
-stimulated cells.
M. leprae
had no
synergistic effect on LILRA2 activated cells. To id
entify LILRA2 ligand, a tetramer was
generated and it’s binding to different cell types
was tested. The tetramer interacted with IL-4
stimulated monocytes and DC. Although Immunoprecipi
tation experiments were preformed, the
ligand was not successfully identified. The data ob
tained so far indicates that LILRA2 activation
enhances DC maturation markers expression and cytok
ine secretion by activated DC.
M. leprae
is
not a potent DC activator. The high surface levels
of co-stimulatory molecules, the presence of
IL-10 and absence of IL-12 suggest that DC stimulat
ed by
M. leprae
or LILRA2 are only partially
activated and they might contribute to lepromatous
leprosy tolerance

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/9110
Date January 2007
CreatorsHernandez, Maristela de Oliveira
ContributorsSampaio, Elizabeth Pereira
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguagePortuguese
Detected LanguagePortuguese
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Sourcereponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ
Rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess

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