OLIVEIRA, Leidelamar Rosário Alves de. Perfil imuno-histoquímico da expressão de ativadores intracelulares com e sem pré-condicionamento com l-alanil-glutamina em modelo de isquemia e reperfusão em cérebros de gerbils. 2012. 100 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-07T13:38:17Z
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Previous issue date: 2012 / We investigated the protective effects of L-alanyl-Glutamine (L-ALN-GLN) through the immunohistochemical detection of proinflammatory mediators (IL-6, TNF, NF-kB e HO-1). This was achieved by means of a experimental and controlled study. Fifty-four male gerbils with a mean weight of 150g were used. They were divided randomly and equally into 3 groups: saline with ischemia and reperfusion (SIR), saline without ischemia and reperfusion (SSI) and with L-alanyl-glutamine and with ischemia and reperfusion (GIR). They were then redistributed into three subgroups according to time: T0 (maximum time of ischemia), T30 (30 minutes of reperfusion) and T60 (60 minutes of reperfusion), containing 6 animals each. They were pretreated with saline 2.0mL 0,9% intra-venously (iv) or L-ALN-GLN 0.75% G/KG (IV) 30 min before the start of the experiments. Cerebral ischemia was performed by bilateral occlusion of the common carotid arteries (CCAs) for a period of 15 minutes. After all surgical procedures and at the end of the three time periods the animals were sacrificed and brain tissue samples immediately obtained, which were fixed in 10% formalin solution for 24 hours in order being duly processed prior paraffin embedding. The samples (brain tissue) were collected at the end of each time periods. After this and through using a microtome, tissue sections were made at 4 microns and then placed on glass slides covered with L-polylysine, a proper way for performing immunohistochemistry. The streptavivin-biotin-peroxidase method was used. The quantitative analysis was made by means of counting immunocytochemically-stained cells, both neurons and glial cells, as observed at 400X magnification under an optical microscope Olympus model BX41. Ten fields were observed for each section, with a total of 4 sections per sub-group, always at start, looking for the internal pyramidal layer. Comparing the groups (SSI) and (SIR) a significant increase in NFkB-labeled cells in the subgroup SIR T30 (238,25±218,437 versus 1234,75±144,857); p=0,001 and SIR T60 (586,50±141,210 versus 1286,25±84,968); p=0,002 was observed. There was also a significant increase in the (SIR) subgroup, of the TNF immunostaining at T30 and T60 (263,75±42,906 versus 1015,50±102,796); p=0,01 in comparison to the SSI group. Regarding the cells expressing IL-6 positive labeling, comparing the groups (SIR) and (GIR), it was observed a significant decrease at T30 and T60 in the GIR group (536,25±119,837 versus 9,00±18,000); p=0,033. Comparing the groups (SIR) and (GIR), in relation to the NFkB immunolabeling, there was a significant decrease in group T30 in the GIR group (1234,75±144,857 versus 247,50±495); p=0,001 as well as at T60 (1286,25±84,968 versus 217,75±435,500); p=0,001. There was also a significant decrease, comparing the groups (SIR) and (GIR), of the TNF expression in (GIR) group at all time periods, chiefly at T60 (1015,50±102,796 versus 3,50±7,000); p=0,001. Regarding the immunostaining of the enzyme HO-1, there has been, comparing the groups (SSI) and (SIR), a significant decrease in the expression of this anti-oxidant protein in the SIR group. In the contrary, comparing the groups SIR and GIR, a substantial and significant expression of HO-1 was documented in the group treated previously by the L-alanil-glutamina, at times T30 and T60. In conclusion, the prior administration of L-alanil-glutamina in experiments of ischemia-reperfusion in Gerbils, disclosed a protective outcome, by promoting an in situ reduction in the expression of pro-inflammatory cytokines (TNF and IL-6) and nuclear transcription factor NFkB. At the same time, there has been an increase in the induction of the expression of the anti-oxidative enzyme HO-1, supporting a protective role of this preconditioning agent, chiefly against the inflammatory-oxidative stress. caused by the ischemia reperfusion brain injury model, in Gerbils / Foi investigado o efeito da administração prévia de L-alanil-glutamina (L-ALN-GLN) nas lesões de isquemia e reperfusão em cérebros de gerbils através da detecção imunohistoquímica da expressão de mediadores pró-inflamatórios e da defesa anti-oxidante (IL-6, TNF, NF-kB e HO-1). Trata-se de um estudo experimental, controlado, utilizando 54 gerbils machos, com peso médio de 150g, distribuídos aleatoriamente em 3 grupos: salina sem isquemia e reperfusão (SSI), salina com isquemia e reperfusão (SIR), L-alanil-glutamina com isquemia e reperfusão (GIR), redistribuídos em 3 subgrupos: T0 (tempo máximo de isquemia), T30 (30 min de reperfusão) e T60 (60 min de reperfusão), com 6 animais por subgrupo. Foram pré-tratados com solução salina 2,0 mL 0,9% via endovenosa (e.v.) ou L-ALN-GLN 0,75g/Kg (e.v.), 30 min antes do início dos experimentos. A isquemia cerebral foi induzida pela oclusão bilateral das artérias carótidas comuns (ACCs), por um período de 15 minutos. Após todos os procedimentos cirúrgicos e ao final dos três tempos 0, 30, 60 minutos, os animais foram sacrificados e tiveram os tecidos cerebrais removidos e fixados em formol a 10% por 24 horas, a fim de serem devidamente processados para inclusão em parafina. Após esse procedimento, foram feitos cortes de 4 µm em micrótomo e colocados em lâminas de L-polilisina, apropriadas para a realização da imunohistoquímica. Foi utilizado o método de estreptavidina-biotina-peroxidase. A avaliação quantitativa foi feita por meio da contagem das células nervosas imunomarcadas, tanto neurônios quanto células da neuroglia, observadas com aumento de 400X em microscópio óptico modelo Olympus BX41. Foram observados dez campos de cada corte, com um total de 4 cortes por subgrupo, procurando-se sempre iniciar pela camada piramidal interna. Nas comparações entre os grupos (SSI) e (SIR) houve um aumento significante nas células NFkB-posittivas no grupo SIR nos tempos T30 (238,3±218,4 versus 1234,8±144,9); p=0,000 e T60 (586,5±141,2 versus 1286,3±85,0); p=0,000. Verificou-se também um aumento significante do TN no grupo SIR nos tempos T30 (214,0±17,3 versus 333,0±395,6); p=0,999 e fortemente, em T60 (263,8±42,9 versus 1015,5±102,8); p=0,00 e observou-se um aumento significante da IL-6 no tempo T60 no grupo SIR em comparação ao grupo SSI, (206,8±248,3 versus 316,0±365,4); p=0,999. Entretanto, as células marcadas pela HO-1, no grupo SIR, comparativamente ao grupo SSI, diminuíram significativamente nos tempos T30 (25,8±3,9 versus 11,3±13,0) p=1,000 e T60 (18,5±7,6 versus 9,8±13,7) p=1,000. Para as células expressando marcação para as citocinas IL-6 em T0 (311,0±246,5 versus 14,8±29,5); p=0,817. T30 (536,3±119,8 versus 9,0,3±18,0); p=0,033. T60 (316,0±365,4 versus 28,5±57,0); p=0,591. E TNF em T0 (30,3±36,0 versus 3,5±7,0); p=1,000 e T30 (333,0±395,6 versus 3,5±7,0); p=0,503, T60 (1015,5±102,8 versus 3,5±7,0); p=0,000 comparando-se os grupos (SIR) e (GIR), observou-se uma diminuição significante, em todos os tempos, no grupo GIR, contrariamente à imunomarcação da HO-1, que aumentou significativamente no grupo (GIR) tratado pela L-alanil-glutamina em T0 (32,5±9,7 versus 0,0+0,0); p=1,000. T30 (11,3±13,0 versus 6,8±13,5); p=1,000 e T60 (9,8±13,7 versus 7,5±15,0); p=1,000. Nas comparações entre os grupos (SIR) e (GIR), em relação ao NFkB, houve uma diminuição significante no grupo GIR em T30 (1234,8±144,9 versus 247,5±495,0); p=0,000 e T60 (1286,3±85 versus 217,8±435,5); p=0,000. Em conclusão, a administração prévia de L-alanil-glutamina, no presente experimento de isquemia/reperfusão cerebral, em gerbils, revelou efeito protetor da mesma, ao promover redução in situ na expressão de citocinas e fator de transcrição de genes pró-inflamatórios: TNF, IL-6 e NFkB. Concomitantemente, houve indução aumentada da expressão da enzima antioxidante HO-1, corroborando a ação protetora deste nutracêutico na injúria de isquemia/reperfusão, mormente do estresse inflamatório-oxidativo, em gerbils
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.repositorio.ufc.br:riufc/15360 |
| Date | January 2012 |
| Creators | Oliveira, Leidelamar Rosário Alves de |
| Contributors | Vasconcelos, Paulo Roberto Leitão de |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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