PAULINO, L.R.F.M. Efeito do fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e da interleucina-1 beta (IL-1β) sobre o desenvolvimento in vitro de folículos secundários bovinos isolados. 2017. 82f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) – Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2017. / Submitted by Mestrado Biotecnologia (biotecnologiasobral@gmail.com) on 2017-03-28T13:50:28Z
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Previous issue date: 2017-03-07 / Ovarian follicular growth is regulated by various substances, such as hormones, growth factors
and cytokines. Tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-1β (IL-1β) are
proinflammatory cytokines that have several sites of synthesis in the ovary. In this context, the
study of the effect of these cytokines during the in vitro growth of preantral follicles is of great
importance for understanding the mechanisms that control follicular development in vitro. The
objective of the present study was to determine the effect of TNF-α and IL-1β on development
and survival of bovine secondary follicles after 18 days of culture in vitro. Secondary follicles
(~0.2mm) were isolated from ovarian cortex of cows and individually cultured. The secondary
follicles were randomly distributed in the following treatments: (I) TCM-199+ alone (culture
control), or supplemented with (II) 10 ng/mL IL-1β, (III) 10 ng/mL TNF-α and (IV) both TNF-
α and IL-1β. The follicles were cultured at 38.5°C, with 5% CO2 in air, for 18 days. Thereafter,
the effect of these treatments on growth, follicular survival, antrum formation, viability,
ultrastructure and mRNA levels for GDF9, C-MOS, H1foo and Cyclin B1 were then evaluated.
At the end of 18 days of in vitro culture, TNF-α increased follicular diameter and the rate of
antrum formation. On the other hand, IL-1β and both IL-1β and TNF-α did not influence follicle
growth. All treatments maintained viability rates after culture between 74.32 and 92.00%.
Ultrastructural analysis of showed that follicles cultured in the presence of TNF-α had oocyte
citoplasm and granulosa cells well preserved. The presence of TNF-α, IL-1β or both did not
influence the expression o mRNAs for GDF9, C-MOS, H1foo and Cyclin B1 after 18 days of
culture. In conclusion, TNF-α promotes follicular growth and maintains the ultrastructure of
isolated bovine secondary follicles cultured in vitro. / O crescimento folicular ovariano é regulado por diversas substâncias, tais como hormônios,
fatores de crescimento e citocinas. O fator de necrose tumoral-α (TNF-α) e a interleucina-1β
(IL-1β) são citocinas pró-inflamatórias que apresentam vários locais de síntese no ovário. Nesse
contexto, o estudo do efeito destas citocinas durante o crescimento in vitro de folículos pré-
antrais é de grande importância para a compreensão dos mecanismos que controlam o
desenvolvimento folicular in vitro. O objetivo do presente estudo foi determinar o efeito do
TNF-α e IL-1β sobre o desenvolvimento e a sobrevivência de folículos secundários bovinos
após 18 dias de cultivo in vitro. Folículos secundários (~ 0,2 mm) foram isolados do córtex
ovariano de vacas e cultivados individualmente. Os folículos secundários foram distribuídos
aleatoriamente nos seguintes tratamentos: (I) TCM-199+ sozinho (controle) ou suplementado
com (II) IL-1β (10 ng/mL), (III) TNF-α (10 ng/mL) e (IV) e ambos TNF-α e IL-1β. Os folículos
foram cultivados a 38,5 °C, com 5% de CO2, durante 18 dias. A cada dois dias, 60 µL de meio
de cultivo foram substituídos por meio fresco. Em seguida, avaliou-se o efeito destes
tratamentos sobre crescimento, sobrevivência folicular, formação do antro, viabilidade,
ultraestrutura e níveis de RNAm para GDF9, C-MOS, H1foo e Ciclina B1. No final de 18 dias
de cultivo in vitro, o diâmetro folicular e taxa de formação de antro aumentaram após o cultivo
em meio suplementado com apenas TNF-α. Todos os tratamentos mantiveram viabilidade após
o cultivo entre 74.32 e 92.00%. A análise da ultraestrutura mostrou que os folículos cultivados
na presença do TNF-α e IL-1β mantiveram a ultraestrutura do citoplasma do oócito e das células
da granulosa. Os folículos cultivados expressaram RNAm para GDF9, C-MOS, H1foo e Ciclina
B1, mas não houve diferença significativa entre os tratamentos. Em conclusão, o TNF-α
contribui para o crescimento folicular e a manutenção da ultra-estrutura de folículos
secundários bovinos cultivados in vitro.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.repositorio.ufc.br:riufc/22850 |
| Date | 07 March 2017 |
| Creators | Paulino, Lais Raiane |
| Contributors | Silva, Anderson, Silva, José Roberto |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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