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Estudo da atividade anticÃncer da marinobufagenina, um bufadienolÃdeo extraÃdo de anfÃbios da espÃcie Rhinella marina / Study of anticancer activity of marinobufagenin, a bufadienolide extracted from amphibians of Rhinella marina species

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O cÃncer à uma complexa doenÃa de origem genÃtica, considerada uma das principais causas de morte por doenÃa no mundo. A utilizaÃÃo de substÃncias derivadas de produtos naturais tem crescido com o passar dos anos, constituindo uma importante fonte no arsenal terapÃutico. Os bufadienolÃdeos sÃo esterÃides cardioativos de 24 carbonos, isolados de extratos de glÃndulas de sapos da famÃlia Bufonidae. Essas molÃculas possuem grande variedade de atividades biolÃgicas, incluindo atividade anticÃncer. Os bufadienolÃdeos tem demonstrado comportamento antiproliferativo em vÃrias linhagens de cÃlulas cancerÃgenas humanas por induzir morte e parada do ciclo celular. A marinobufagenina, um bufadienolÃdeo extraÃdo do anfÃbio Rhinella marina, foi escolhida para determinamos o seu padrÃo citotÃxico e mecanismo de aÃÃo. Apesar de demonstrar alta citotoxicidade em cÃlulas tumorais humanas, a amostra nÃo apresentou citotoxicidade para linhagens murinas. Experimentos in vitro foram realizados utilizando-se a linhagem de adenocarcinoma de prÃstata PC3. As cÃlulas foram tratadas com diferentes concentraÃÃes da amostra marinobufagenina (0,37, 0,75 e 1,5 μM) por 24 horas. A viabilidade das cÃlulas PC3 foi avaliada por citometria de fluxo, mostrou que o nÃmero de cÃlulas reduziu a partir da menor concentraÃÃo (0,37 μM) testada sem, contudo, haver reduÃÃo na porcentagem de cÃlulas com membrana Ãntegra. A anÃlise da externalizaÃÃo da fosfatidilserina por citometria de fluxo revelou aumento de cÃlulas com padrÃo apoptÃtico nas concentraÃÃes 0,75 e 1,5 μM. Jà a anÃlise do conteÃdo nuclear, nos mostrou acÃmulo de cÃlulas na fase G2/M em todas as concentraÃÃes testadas. A marinobufagenina nÃo foi capaz de causar danos ao DNA de PC3 e de CMSP. Observou-se, ainda, uma sÃrie de alteraÃÃes morfolÃgicas e no citoesqueleto de cÃlulas tratadas com o bufadienolÃdeo, a exemplo da acentuada retraÃÃo citoplasmÃtica e formaÃÃo de halos perinucleares. AlÃm disso, modificaÃÃes do padrÃo adesivo das cÃlulas tambÃm foram observadas em cÃlulas tratadas com o bufadienolÃdeo. Apesar de necessitar de mais estudos para delinear seu mecanismo de aÃÃo anticÃncer; as modificaÃÃes morfolÃgicas, o comportamento ciclo-especÃfico e a ausÃncia de genotoxicidade tornam a Marinobufagenina uma molÃcula interessante na prospecÃÃo de novos fÃrmacos com potencial antitumoral. / Cancer is a complex genetic disease, considered one of the leading causes of death in the world. The use of substances derived from natural products has grown over the years and is an important source for the therapeutic arsenal. Bufadienolides, a group of cardioactive steroids with a 24 carbon structures are commonly found in glands of toads from Bufonidae family. These molecules a have wide range of biological activities, including anti-cancer effects. Bufadienolides have shown anti-proliferative effect on various human cancer cell lines by inducing death and cell cycle arrest. Marinobufagenin, a bufodienolide extracted from Rhinella marina toad especies was chosen to determine its standard cytotoxic and mechanism of action. Despite showing high cytotoxicity in human tumor cells, the sample showed no cytotoxicity to murine strains. In vitro experiments were performed using the PC3 prostate adenocarcinoma lineage. Cells were incubated with different concentrations of marinobufagenin (0.37, 0.75 and 1.5 mM) for 24 hours. The viability of PC3 cells was evaluated by flow cytometry, which showed that the number of cells reduced when incubated with the lowest concentration (0.37 mM) tested. However, no reduction in the percentage of cells with intact membranes was seen. The analysis of phosphatidylserine externalization by flow cytometry also revealed the increase of apoptotic cells at concentrations 0.75 and 1.5 uM. The flow citometry analysis of the nuclear contents, showed the accumulation of cells in G2 / M phase in all tested concentrations. Marinobufagenin did not damage the DNA in either PC3 or PBMC. In addiction, morphological changes were observed, including cytoplasmic shrinkage and perinuclear halo formation. Moreover, modifications on the pattern of cells adesion were also observed in cells treated with the bufadienolide. Despite lack of further studies to confirm its anticancer mechanisms, morphological changes occurred, the cycle-specific behavior and the lack of genotoxicity of Marinobufagenina make it an interesting molecule in the search for new drugs with antitumor potential.

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:10826
Date22 January 2016
CreatorsDaisy Jereissati Barbosa Lima
ContributorsClÃudia do à Pessoa, Roberto CÃsar Pereira Lima JÃnior, Paulo Michel Pinheiro Ferreira
PublisherUniversidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Farmacologia, UFC, BR
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguagePortuguese
Detected LanguageEnglish
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis
Formatapplication/pdf
Sourcereponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC
Rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess

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