CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / Clostridium difficile (C. difficile) is the major cause of colitis associated with the use of antibiotics, with significant morbidity and mortality. The enteric nervous system (ENS) is located in the gastrointestinal tract (GIT) and has an important function of regulating the digestive system. The P2X7 receptor participates in the regulation of cellular permeability, cytokine release and apoptosis, processes that are involved in the pathogenesis of C. difficile induced disease.The aim of this study was to analyze the role of the P2X7 receptor in enteritis induced by C. difficile toxin A (TcdA). The mouse ileal loop was injected with saline (Sodium Chloride 0.9% - Control) or TcdA (50 μg / loop) in mice previously treated with the inhibitors: BBG (50 mg/kg) or A438079 (10 μM) i.p.injection 1 h prior to TcdA (TcdA + BBG; TcdA + A438079) or saline injection. The animals were euthanized after 4h latter and the ileal loop collected for the following analyzes: immunofluorescence for ChAT, NOS, P2X7 and calretinin in membrane preparations, immunohistochemistry for GFAP, HuC / D, S-100β, TUNEL and PCR for P2X7. The results demonstrated that TcdA significantly reduced myenteric plexus neurons in 66.42% when compared to the control, while in the membrane preparations a significant reduction of the immunoreactive neurons to ChAT was observed in 23.21% and Calretinin 28.17%. However, there was a 21.23% increase in labeling for the P2X7 receptor over the control. In the ileal tissue there was an increase of 411.95% and 22.40% respectively in the P2X7 positive area and in the gene expression. In relation to the glial markers, an increase of 125.71% and 144.30% was observed for GFAP and S-100β, respectively. In animals treated with inhibitors P2X7; BBG and A438079, as observed an improvement in histological parameters . In addition , a significant reduction in the number of apoptotic cells decrease in GFAP and S-100β-labeled cells, and cytokines ( TNF-α, IL-1β, IL -6 and IL-8) levels, compared to the control. This was associated with a significant increase in the HuC/D positive area . From these results, it is concluded that TcdA promotes changes in the enteric nervous system, increasing neuronal death and activating glial cells, and that the P2X7 receptor plays an important role in the changes induced by C. difficile TcdA. / O Clostridium difficile (C. difficile) à a maior causa de colite associada ao uso de antibiÃticos, com significante morbidade e mortalidade. O sistema nervoso entÃrico (SNE) està localizado no trato gastrointestinal (TGI) e possui importante funÃÃo de regulaÃÃo do sistema digestÃrio. O receptor P2X7 presente nas cÃlulas gliais entÃricas (CGE) e no SNE participa na regulaÃÃo da permeabilidade celular, liberaÃÃo de citocinas e apoptose, processos que estam envolvidos na patogÃnese do C. difficile. O objetivo deste estudo foi analisar o papel do receptor P2X7 na enterite induzida pela toxina A (TcdA) do C. difficile. A alÃa ileal dos camundongos foi injetada com salina (Cloreto de SÃdio 0,9%- Controle) ou TcdA (50 μg/alÃa) em camundongos previamente tratados com os inibidores: BBG (50 mg/kg) ou A438079 (10 μM) via intraperitoneal 1h antes da injeÃÃo da TcdA ou salina. Os animais foram eutanaziados apÃs 4h da injeÃÃo e a alÃa ileal coletada para as seguintes analises: imunofluorescÃncia para ChAT, NOS, P2X7 e calretinina nos preparados de membrana, imunohistoquÃmica para GFAP, HuC/D, S-100β, TUNEL e PCR para P2X7. Os resultados demonstraram que a TcdA reduziu significativamente em 66,42% os neurÃnios do plexo mioentÃrico quando comparado ao controle, enquanto nos preparados de membrana observou-se uma reduÃÃo significativa dos neurÃnios imunorreativos a ChAT em 23,21% e Calretinina 28,17%, contudo, houve um aumento de 21,23% da marcaÃÃo para o receptor P2X7 em relaÃÃo ao controle. No tecido ileal verificou-se um aumento de 411,95% e 22,40% respectivamente na Ãrea positiva para P2X7 e na expressÃo gÃnica. Em relaÃÃo aos marcadores gliais, observou-se um aumento de 125,71% e 144,30% para GFAP e S-100β, respectivamente. Nos animais tratados com os inibidores de P2X7: BBG e o A438079 observou-se uma melhora dos parÃmetros histolÃgicos, uma reduÃÃo significativa do nÃmero de cÃlulas apoptÃticas, das cÃlulas marcadas para GFAP e S-100β, das citocinas: TNF-α, IL-1β, IL-6 e IL-8 com relaÃÃo ao controle e um aumento significativo na Ãrea positiva para HuC/D em relaÃÃo a TcdA. A partir desses resultados, concluiu-se que a TcdA promoveu alteraÃÃes no sistema nervoso entÃrico, aumentando a morte neuronal e ativando as cÃlulas da glia, e que o receptor P2X7 tem participaÃÃo importante nas alteraÃÃes induzidas pela TcdA do C. difficile.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:11925 |
| Date | 16 January 2017 |
| Creators | Ana AngÃlica Queiroz AssunÃÃo Santos |
| Contributors | Gerly Anne de Castro Brito, Pedro Marcos Gomes Soares, Paula Goes Pinheiro Dutra, Maria Rosimar Teixeira Matos, PATRICIA CASTELUCCI |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em CiÃncias MÃdicas, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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