FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / A utilizaÃÃo de plantas medicinais tem sido evidenciada desde os primÃrdios para aliviar e tratar doenÃas e sua utilizaÃÃo tem crescido com o passar dos anos, constituindo uma importante fonte no arsenal terapÃutico. A espÃcie Annona muricata, conhecida popularmente como gravioleira, possui ampla utilizaÃÃo como medicamento tradicional e estudos conduzidos com seus metabÃlitos secundÃrios bioativos vÃm apresentando notÃvel atividade antitumoral ligada Ãs acetogeninas. Nesse contexto o presente estudo objetivou o fracionamento bioguiado do extrato acetÃnico das sementes de A. muricata para prospecÃÃo de molÃculas com potencial citotÃxico em linhagens celulares tumorais humanas, resultando no isolamento de uma acetogenina denominada annonacinona. O estudo à pioneiro na avaliaÃÃo da atividade citotÃxica da molÃcula. Todas as fraÃÃes, subfraÃÃes e annonacinona apresentaram potencial citotÃxico nas linhagens tumorais testadas. A annonacinona apresentou valores de CI50 que variaram de 3,7 ÂM a 0,19 ÂM em cÃlulas tumorais de cÃlon (SW620) e glioblastoma (SF-295), respectivamente apÃs 72 horas de incubaÃÃo. O perfil citotÃxico em diferentes perÃodos de incubaÃÃo foi realizado em cÃlulas SF-295 e cÃlulas de pulmÃo (NCI-H460). O efeito citotÃxico em cÃlulas SF-295 foi observado apenas apÃs 72 horas de incubaÃÃo, enquanto que em cÃlulas NCI-H460, esse efeito foi observado em 48 horas com CI50 de 0,21 ÂM e mantendo-se apÃs 72 horas de incubaÃÃo. A anÃlise temporal da citotoxicidade da annonacinona em cÃlulas NCI-H460 foi avaliada por dois ensaios distintos, MTT e SRB que apresentaram divergÃncias nos valores, sugerindo que o ensaio do SRB seja mais efetivo para esse tipo de classe de substÃncias por depender do conteÃdo de proteÃnas sem interferÃncia do composto. A annonacinona apresentou diminuiÃÃo da densidade celular em todas as concentraÃÃes testadas em cÃlulas NCI-H460 apÃs 48 horas de incubaÃÃo, embora apÃs esse tempo de tratamento nÃo tenha sido possÃvel avaliar dano de DNA, progressÃo do ciclo celular e padrÃo de morte celular. Em anÃlise sobre a proliferaÃÃo e viabilidade em tempo real, a annonacinona apresentou inibiÃÃo do crescimento celular nas concentraÃÃes testadas e inÃcio de declÃnio do Ãndex celular apÃs 56 horas de tratamento. Conclui-se que a acetogenina annonacinona apresenta evidente atividade citotÃxica in vitro, com maior efeito em cÃlulas NCI-H460, no entanto, outros testes devem ser realizados com tempos de tratamentos maiores para melhor avaliaÃÃo da sua atividade biolÃgica e potencial terapÃutico desta molÃcula. / The use of medicinal plants has been evidenced since the beginning to relieve and treat diseases and its use has grown over the years, constituting an important source in the therapeutic arsenal. The species Annona muricata, popularly known as soursop, is widely used as a traditional drug and studies conducted with its bioactive secondary metabolites have shown remarkable antitumor activity related to acetogenins. In this context, the present study aimed the bioguided fractionation of the acetonic extract of the A. muricata seeds to prospect for molecules with cytotoxic potential in human tumor cell lines, resulting in the isolation of an acetogenin called annonacinone. The study is a pioneer in the evaluation of the cytotoxic activity of the molecule. All fractions, subfractions and annonacinone presented cytotoxic potential in the tumor lines tested. The annonacinone showed IC50 values ranging from 3.7 μM to 0.19 μM in colon tumor cells (SW620) and glioblastoma (SF-295), respectively after 72 hours of incubation. The cytotoxic profile at different periods of incubation was performed on SF-295 cells and lung cells (NCI-H460). The cytotoxic effect on SF-295 cells was observed only after 72 hours of incubation, whereas in NCI-H460 cells, this effect was observed at 48 hours with IC50 of 0.21 μM and maintained after 72 hours of incubation. The temporal analysis of the cytotoxicity of annonacinone in NCI-H460 cells was evaluated by two different assays, MTT and SRB, which showed differences in the values, suggesting that the SRB assay is more effective for this kind of substance class because it depends on the protein content without interference of the compound. Annonacinone showed a decrease in cell density at all concentrations tested on NCI-H460 cells after 48 hours of incubation, although after this time of treatment it was not possible to evaluate DNA damage, cell cycle progression and cell death pattern. In an real-time analysis of the proliferation and viability, the annonacinone showed inhibition of the cellular growth in the tested concentrations and beginning of decline of the cellular index after 56 hours of treatment. It is concluded that acetogenin annonacinone presents evident cytotoxic activity in vitro, with greater effect in NCI-H460 cells, however, other tests should be performed with longer treatment times for a better evaluation of its biological activity and therapeutic potential of this molecule.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:11992 |
| Date | 26 January 2017 |
| Creators | Gabriel GusmÃo Grisi Rocha |
| Contributors | Manoel Odorico de Moraes Filho, Roberto CÃsar Pereira Lima JÃnior, Francisco Washington AraÃjo Barros |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Farmacologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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