CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Compostos naturais tem sido utilizado como fontes de novas molÃculas com atuaÃÃo no sistema nervoso central. Recentemente nosso grupo de pesquisa observou a aÃÃo anticonvulsivante do veneno da formiga Dinoponera quadriceps em modelo de convulsÃo induzido pelo pentilenotetrazol (PTZ). Com o intuito de descobrir quais molÃculas presentes no veneno sÃo responsÃveis pelo efeito mencionado, o peptÃdeo Dq-Fa, componente natural encontrado no veneno da formiga Dinoponera quadriceps, foi sintetizado, intitulado de LS9, e utilizado no presente estudo em modelo de convulsÃo induzido por PTZ e sobre cultura de astrÃcitos in vitro. Camundongos Swiss machos (28-33g) foram prÃ-tratados com o LS9 (0,1; 0,2 ou 0,4 mg/kg, i.p., n= 6-8). Meia hora apÃs o prÃ-tratamento foi induzida a convulsÃo em todos os animais atravÃs da administraÃÃo de PTZ (80 mg/kg). Na anÃlise comportamental, foram registrados os tempos para ocorrÃncia da primeira convulsÃo e tempo de morte. Para determinaÃÃo dos parÃmetros de estresse oxidativo foram utilizadas trÃs Ãreas cerebrais (cÃrtex prÃ-frontal, hipocampo e corpo estriado) e mensurado os nÃveis de malondialdeÃdo (MDA), o conteÃdo de nitrito e nÃvel de glutationa reduzida (GSH). No ensaio in vitro, foi determinada a viabilidade celular de astrÃcitos corticais, apÃs o tratamento com diferentes concentraÃÃes de LS9 ou LS9 + PTZ, durante 24 horas, pelo mÃtodo do MTT (brometo de 3- (4,5-dimetil-2-tiazol) -2,5-difenil-2-H). Os dados foram analisados por ANOVA e Student-Newman-Keuls como pÃs-teste, para os ensaios in vivo, e ANOVA seguido pelo pÃs-teste de Bonferroni, para as experimentaÃÃes in vitro. Os resultados comportamentais encontrados mostraram que todas as concentraÃÃes analisadas do peptÃdeo foram capazes de aumentar a latÃncia para a ocorrÃncia da primeira convulsÃo, sendo que a concentraÃÃo de 0,2mg/kg aumentou, significativamente, o perÃodo de latÃncia de morte. Houve diminuiÃÃo dos nÃveis de MDA no cÃrtex prÃ-frontal (nas concentraÃÃes 0,1 e 0,2mg/kg), hipocampo (na concentraÃÃo de 0,1mg/kg) e corpo estriado (em todas as concentraÃÃes analisadas). Todas as concentraÃÃes testadas foram capazes de diminuir, significantemente, a formaÃÃo de nitrito no cÃrtex prÃ-frontal. No hipocampo e no corpo estriado o efeito foi semelhante, porÃm nÃo em todas as concentraÃÃes. Na concentraÃÃo de 0,2mg/kg, houve aumento dos nÃveis de GSH no cÃrtex prÃ-frontal, as concentraÃÃes de 0,1 e 0,2mg/kg promoveram aumento no corpo estriado e nÃo houve alteraÃÃo no hipocampo. No ensaio in vitro, os resultados mostram que esse peptÃdeo nÃo foi capaz de diminuir a viabilidade de astrÃcitos corticais e nÃo promoveu alteraÃÃo da viabilidade celular quando associado com PTZ. Nossos achados demonstram que o peptÃdeo sintÃtico LS9 promoveu efeito anticonvulsivante, diminuiu a produÃÃo de peroxidaÃÃo lipÃdica e nitrito e aumentou GSH. AlÃm disso, nÃo foi capaz de alterar a viabilidade celular em cultura de astrÃcitos corticais in vitro, nÃo demonstrando efeito tÃxico nessa linhagem celular. / Natural compounds have been used as sources of new molecules acting in the central nervous system. Recently our research group observed the anticonvulsant action of ant venom Dinoponera quadriceps in model of seizure induced by pentylenetetrazole (PTZ). In order to find out which molecules present in the venom are responsible for the mentioned effect, the peptide Dq-Fa, a natural component found in the venom of the Dinoponera quadriceps ant, was synthesized, titled LS9, and used in the present study in a model of convulsion induced by PTZ and on astrocyte culture in vitro. Male Swiss mice (28-33g) were pretreated with LS9 (0.1, 0.2 or 0.4 mg / kg, i.p., n = 6-8). Half an hour after pretreatment, seizure was induced in all animals by administration of PTZ (80 mg / kg). In the behavioral analysis, the times for the occurrence of the first seizure and time of death were recorded. To determine the parameters of oxidative stress, three cerebral areas (prefrontal cortex, hippocampus and striatum) were used and malondialdehyde (MDA), nitrite content and reduced glutathione levels (GSH) were measured. In the in vitro assay, the cell viability of cortical astrocytes was determined after treatment with different concentrations of LS9 or LS9 + PTZ for 24 hours by the MTT method (3- (4,5-dimethyl-2-thiazole bromide) -2, 5-diphenyl-2-H). The data were analyzed by ANOVA and Student-Newman-Keuls as a post-test, for the in vivo tests, and ANOVA followed by the Bonferroni post-test, for the in vitro experiments. The behavioral results found showed that all the analyzed concentrations of the peptide were able to increase the latency for the first seizure, with a concentration of 0.2 mg / kg significantly increased the latency period of death. There was a decrease in MDA levels in the prefrontal cortex (0.1 and 0.2 mg / kg concentrations), hippocampus (0.1 mg / kg concentration) and striatum (in all concentrations analyzed). All concentrations tested were able to significantly decrease the formation of nitrite in the prefrontal cortex. In the hippocampus and striatum the effect was similar, but not at all concentrations. At concentrations of 0.2 mg / kg, there was an increase in GSH levels in the prefrontal cortex, concentrations of 0.1 and 0.2 mg / kg promoted an increase in the striatum and there was no change in the hippocampus. In the in vitro assay, the results show that this peptide was not able to decrease the viability of cortical astrocytes and did not promote alteration of cell viability when associated with PTZ. Our findings show that the synthetic peptide LS9 promoted anticonvulsant effect, decreased production of lipid peroxidation and nitrite and increased GSH. In addition, it was not able to alter cell viability in cortical astrocyte culture in vitro, demonstrating no toxic effect in this cell line.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:11994 |
| Date | 12 January 2017 |
| Creators | Livia Correia Fernandes Paes |
| Contributors | Alice Maria Costa Martins, Marta Maria de FranÃa Fonteles, Gandhi RÃdis Baptista |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Farmacologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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