CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A doenÃa do refluxo nÃo erosiva (NERD) afeta cerca de 70% dos pacientes com sintomas de refluxo. Esses pacientes nÃo apresentam erosÃes na mucosa esofÃgica à endoscopia, porÃm exibem integridade epitelial comprometida e expressÃo aumentada do receptor vanilÃide de potencial transitÃrio tipo 1 (TRPV1). AlÃm disso, o Ãcido clorÃdrico (HCl) ativa TRPV1 com liberaÃÃo de mediadores inflamatÃrios. Entretanto, nÃo existe um modelo experimental de NERD e o papel do receptor TRPV1 nessa doenÃa à desconhecido. Objetivo: Padronizar um modelo experimental de NERD em camundongos e investigar o papel do receptor TRPV1 na inflamaÃÃo e comprometimento da barreira epitelial esofÃgica. MÃtodos: A NERD foi induzida cirurgicamente em camundongos Swiss (30-35g, Comità de Ãtica: 104/14) por substenose do piloro e ligadura do fundo gÃstrico. O grupo controle foi o Sham (falso operado). Os animais foram sacrificados 1, 3, 7 e 14 dias pÃs-cirÃrgico. Outro delineamento consistiu de animais sacrificados no 7 dia; Grupo I: Sham, II: NERD, III: Omeprazol (um IBP: 40 mg/kg, i.p.), IV e V: SB366791 e capsazepina (antagonistas de TRPV1: 3 e 5 mg/kg, i.p.) e VI: resiniferatoxina (RTX, para depletar TRPV1: por 3 dias, 30 Âg/kg, 70 Âg/kg e 100 Âg/kg, s.c.). A sobrevida e o peso corporal foram monitorados diariamente, foram tambÃm analisados o peso Ãmido, macroscopia, histologia, mieloperoxidase (MPO) e citocinas no esÃfago. A resistÃncia elÃtrica transepitelial (TEER) foi avaliada com exposiÃÃo à pH 1,0 ou 0,5 contendo pepsina (1 mg/ml) e Ãcido taurodeoxicÃlico (TDCA: 2 mM) e a permeabilidade sem exposiÃÃo Ãcida. Resultados: A taxa de sobrevida foi de 78% no 14 dia, com leve perda no peso corporal. A cirurgia nÃo induziu esofagite erosiva (EE), mas sim alteraÃÃes microscÃpicas esofÃgicas, aumentou o peso Ãmido, os nÃveis de IL-6 e KC, bem como a atividade de MPO no esÃfago, com pico entre 3 e 7 dias e resoluÃÃo 14 dias pÃs-cirÃrgico. A intervenÃÃo Sham nÃo provocou inflamaÃÃo esofÃgica. O comprometimento da barreira epitelial esofÃgica foi avaliado por meio tÃcnica de cÃmara de Ussing, nos dias 7 e 14 pÃs-cirÃrgico, e foi observada diminuiÃÃo da TEER e aumento da permeabilidade em animais com NERD, comparado ao grupo Sham. O modelo no dia 7 foi selecionado para os experimentos seguintes. A inibiÃÃo da secreÃÃo Ãcida com omeprazol, o bloqueio farmacolÃgico de TRPV1 com capsazepina e SB366791 e a depleÃÃo com RTX preveniram a inflamaÃÃo esofÃgica, a queda da TEER e o aumento da permeabilidade, comparados com o grupo NERD. ConclusÃo: Um novo modelo de NERD em camundongos foi implementado e validado, e demostramos que o receptor TRPV1 tem um papel crÃtico na inflamaÃÃo esofÃgica, e està envolvido no comprometimento da integridade da barreira epitelial induzidos por Ãcido, ao qual contribui para o entendimento da fisiopatologia da NERD. / Non-erosive reflux disease (NERD) affects about 70% of patients with reflux symptoms. These patients do not present erosions in the esophageal mucosa at endoscopy, but exhibit impaired epithelial integrity and increased expression of transient receptor potential vanilloid 1 (TRPV1). In addition, chloridric acid (HCl) activates TRPV1 with release of inflammatory mediators. However, there is no experimental model of NERD and the role of TRPV1 receptor in this disease is unknown. Aim: To standardize an experimental model of NERD in mice and investigate the role of TRPV1 receptor in inflammation and impairment of esophageal epithelial barrier. Methods: NERD was induced surgically in Swiss mice (30-35g, Ethics Committee: 104/14) by stenosis pyloric and gastric fundus ligation. The control group was Sham (operated false). The animals were sacrificed 1, 3, 7 and 14 days post-surgery. Another design consisted of animals sacrificed on the 7th day; Group I: Sham, II: NERD, III: Omeprazole (a PPI: 40 mg/kg, i.p.), IV and V: SB366791 and capsazepine (TRPV1 antagonists: 5 mg/kg, i.p.) and VI: resiniferatoxin (RTX, to deplete TRPV1: for 3 days, 30 μg/kg, 70 μg/kg and 100 μg/kg, s.c.). Survival and body weight were monitored daily, were also analyzed the wet weight, macroscopy, histology, myeloperoxidase (MPO) and cytokines in the esophagus. Transepithelial electrical resistance (TEER) was evaluated with exposure to pH 1.0 or 0.5 containing pepsin (1 mg/ml) and taurodeoxycholic acid (TDCA: 2 mM) and the permeability without acid exposure. Results: The survival rate was 78% at 14 day, with a mild loss in body weight. Surgery did not induce erosive esophagitis (EE), but induced microscopic inflammation, increased wet weight, IL-6 and KC levels and MPO activity in the esophagus, with peak between 3 and 7 days and resolution 14 days post-surgery. Sham intervention did not cause esophageal inflammation. The impairment of the esophageal epithelial barrier was evaluated using the Ussing chamber technique, on 7 and 14 days post-surgery, and was observed decrease TEER and increase permeability in NERD animals, compared to the Sham group. The model on day 7 was selected for the following experiments. Inhibition of acid secretion with omeprazole, pharmacological blockade with capsazepine and SB366791, and depletion of TRPV1 with RTX prevented esophageal inflammation, decrease TEER, and increase permeability, compared to the NERD animals. Conclusion: A novel model of NERD in mice was implemented and validated, and we demonstrated that the TRPV1 receptor plays a critical role in esophageal inflammation, and is involved in the acid-induced impairment epithelial barrier, which contributes to the understanding of the pathophysiology of NERD.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:12002 |
| Date | 10 February 2017 |
| Creators | Renan Oliveira Silva |
| Contributors | Marcellus Henrique Loiola Ponte de Souza, Aldo Ãngelo Moreira Lima, ArmÃnio Aguiar dos Santos, Gardenia Costa do Carmo, Jand-Venes Rolim Medeiros |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Farmacologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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