Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Venenos de Bothrops consistem em uma mistura complexa de substÃncias ativas, principalmente peptÃdeos e proteÃnas, capazes de interferir com muitos processos fisiolÃgicos. Serpentes do gÃnero Bothrops sÃo responsÃveis por mais de 20 mil acidentes por ano no Brasil, que totalizam 90% de todos os acidentes ofÃdicos registrados. A Bothrops leucurus à uma serpente peÃonhenta importante que habita a regiÃo nordeste do Brasil. Os efeitos biolÃgicos devido ao envenenamento tÃm perfil semelhante ao observado em outras Bothrops, ou seja, a atividade coagulante, hemorrÃgica, fibrinolÃtica e insuficiÃncia renal in vivo. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos do veneno de Bothrops leucurus no sistema de perfusÃo renal e em culturas de cÃlulas tubulares renais do tipo MDCK (Madin-Darby Canine kidney). Rins isolados de ratos Wistar pesando 250 a 300g (n = 5) foram perfundidos com Krebs-Henseleit contendo 6% de albumina sÃrica bovina previamente dialisadas por 120 minutos. Os efeitos do veneno de Bothrops leucurus (VBl)
(10μg/mL) foram estudados sobre o Ritmo de FiltraÃÃo Glomerular (RFG), Fluxo UrinÃrio (FU), PressÃo de PerfusÃo (PP), ResistÃncia Vascular Renal (RVR), Percentual de Transporte Tubular de SÃdio (%TNa+), de PotÃssio (%TK+) e de Cloreto (%TCl-). O veneno de B. leucurus (10 μg / mL) reduziu a PP aos 90 e 120 min e o FU aos 60 e 90 min. O ritmo de filtraÃÃo glomerular diminuiu aos 60 e 90 min. A resistÃncia vascular renal diminuiu aos 120 min. Observou-se tambÃm uma diminuiÃÃo no percentual de transporte tubular de sÃdio (% TNA+) aos 120 min e de cloreto (% TCL-) aos 60 e 90 min. CÃlulas MDCK foram cultivadas em garrafas plÃsticas a 37ÂC em atmosfera de 5% de CO2, com meio RPMI 1640 suplementado com soro bovino fetal a 10%. O tratamento com VBl causou diminuiÃÃo da viabilidade celular atà na menor concentraÃÃo testada com um IC50 de 1,25 μg /mL. Citometria de fluxo com anexina V e iodeto de propÃdio mostrou que a morte celular ocorreu predominantemente por necrose de forma concentraÃÃo dependente. Quando a apoptose foi analisada atravÃs da coloraÃÃo nuclear, foi observado aumento significativo na porcentagem de morte celular, VBl nas concentraÃÃes de 2,5 e 1,5 μg/mL induziu 6,8% e 5,8% de apoptose apÃs 24 horas de tratamento, respectivamente. O tratamento com VBl (1,25 μg/mL) levou a despolarizaÃÃo significativa do potencial de membrana mitocondrial. Nas menores concentraÃÃes avaliadas, verificamos aumento de expressÃo de genes envolvidos na morte celular por apoptose. O Ãon Ca2+ participa da sinalizaÃÃo da morte celular induzida pelo veneno de B. leucurus. Esses resultados demonstram que o veneno de B. leucurus alterou todos os parÃmetros renais avaliados na perfusÃo de rim isolado e foi citotÃxico para cultura de cÃlulas MDCK. / Bothrops venoms consist of complex mixture of active substances, mainly peptides and proteins, which interfere with many physiologic processes. Bothrops species are responsible for more than 20,000 accidents per year in Brazilâ90% of all recorded snakebites. The Bothrops leucurus is an important venomous snake that inhabits the northeast of Brazil. The biological effects due envenomation have similar profile to that observed in other Bothrops, ie coagulant activity, hemorrhagic, fibrinolytic, and renal failure in vivo. The aim of this study was to investigate the effects of the Bothrops leucurus venom in the renal perfusion system and in cultured renal tubular cells of the type MDCK (MadinâDarby Canine kidney). Isolated kidneys from Wistar rats weighing 250 to 300g (n=5) were perfused with Krebs-Henseleit solution containing 6% of bovine serum albumin previously dialyzed for 120 minutes. The effects of Bothrops leucurus venom (VBl) (10μg/mL) were studied on the Perfusion Pressure (PP), Renal Vascular Resistance (RVR), Urinary Flow (UF), Glomerular Filtration Rate (GFR) Percentage of Sodium (%TNa+), Potassium (%TK+) and Chloride (%TCl-) Tubular Transport. B. leucurus venom (10 μg/mL) reduction the PP at 90 and 120 min and UF at 60 and 90 min. The glomerular filtration rate decreased at 60 and 90 min. The renal vascular resistance decreased at 120 min. It was also observed a decrease on percentual tubular transport of sodium (%TNa+) at 120 min and of chloride (%TCl-) at 60 and 90 min. MDCK cells were grown in plastic flasks at 37 C in a humidified atmosphere of 5% CO2 â air, with RPMI 1640 medium supplemented with 10% fetal calf serum. The treatment with VBl caused decrease in cell viability to the lowest concentration tested with an CI50 of 1.25 μg/mL. Flow cytometry with annexin V and propidium iodide showed that cell death occurred predominantly by necrosis. When apoptosis was analyzed by nuclear staining, it was observed significant increase in the percentage of cell death, VBl 2,5 μg/mL induced 6,8% apoptosis and VBl 1,25 μg/mL caused 5,8% of apoptosis after 24 h of treatment. VBl treatment (1,25 μg/mL) led to significant depolarization of the mitochondrial membrane potential. We found increased expression of genes involved in cell death by apoptosis in the lower concentrations tested. The ion Ca2+ signaling participates in cell death induced by the venom of B. leucurus. These results demonstrate that the venom of B. leucurus altered all the renal parameters assessed in isolated kidney perfusion and was cytotoxic to MDCK cell culture.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:5383 |
| Date | 12 July 2011 |
| Creators | Isabel Cristina de Oliveira Morais |
| Contributors | Alice Maria Costa Martins, JanaÃna Serra Azul Monteiro Evangelista, ArlÃndia Cristina Lima Nobre de Morais |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Farmacologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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