CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Nas infecÃÃes experimentais, estudos utilizando inÃculo purificado de Leishmania, com populaÃÃes metacÃclicas mais homogÃneas, tem sido importantes por se aproximarem mais da condiÃÃo de infecÃÃo natural e por eliminar uma possÃvel resposta inflamatÃria induzida por restos parasitÃrios. A superfÃcie dos vÃrios parasitos reveste-se por diversos glicoconjugados. Estes, por sua vez, podem ser reconhecidos especifica e reversivelmente por lectinas, proteÃnas que possuem afinidade a carboidratos. Por conta disso, tem-se tentado purificar promastigotas metacÃclicas de culturas de Leishmania atravÃs de aglutinaÃÃo mediada por lectinas. Com esse intuito, buscou-se avaliar se lectinas de diferentes especificidades seriam capazes de aglutinar promastigotas de L. amazonensis em diferentes estÃgios evolutivos. Para isso, foi utilizado um painel de 7 lectinas, e a especificidade de ligaÃÃo aos carboidratos de superfÃcie foi analisada atravÃs de ensaios de aglutinaÃÃo, sendo a lectina de Dioclea violacea (DVL) selecionada para a realizaÃÃo dos ensaios in vivo. A DVL foi capaz de aglutinar L. amazonensis num percentual de 78% em cultura de fase logarÃtmica e 52% em fase estacionÃria. Em seguida, promastigotas de fase estacionÃria foram incubadas com DVL para avaliar se a aglutinaÃÃo era estÃgio-especifica. Posteriormente, realizou-se infecÃÃo experimental em hamsters dourados (106 promastigotas/animal) para avaliar a infectividade das fraÃÃes purificadas. Os animais foram divididos em 3 grupos: FraÃÃo aglutinada (FA) (n=8); FraÃÃo nÃo aglutinada (FNA) (n=9); Controle positivo (CT) (n=8). A evoluÃÃo da infecÃÃo foi acompanhada pelo tamanho da lesÃo, nas 6 semanas pÃs-infecÃÃo e pela quantificaÃÃo da carga parasitÃria no linfonodo regional, por diluiÃÃo limitante, bem como pela anÃlise anatomopatolÃgica das lesÃes. Em todos os grupos as lesÃes iniciaram na 3 semana. O tamanho da lesÃo foi muito semelhante em todos os grupos, com exceÃÃo da 4 e 5 semanas, onde FNA apresentou uma variaÃÃo transitÃria (p<0,01). Quanto à carga parasitÃria e Ãs alteraÃÃes histopatolÃgicas nÃo houve diferenÃa entre os grupos avaliados. Esses dados sugerem que, embora a DVL seja capaz de se ligar especificamente aos glicoconjugados de superfÃcie das promastigotas, induzindo importante poder de aglutinaÃÃo nas duas fases de crescimento, ela nÃo foi capaz de selecionar formas infectantes de L. amazonensis. / In experimental leishmaniasis infections, the use of metacyclic enriched inoculum is very important because it can simulate the natural infection and avoids the inflamatory response induced by the high density parasite inoculum. The surface of different evolutionary forms of Leishmania is coated by several glycoconjugates that can be recognized specifically and reversibly by lectins, proteins that have affinity with carbohydrates. This being the case, one could use lectins in order to purify metacyclic Leishmania. The aim of the current study was to evaluate whether lectins of different specificities would agglutinate L. amazonensis promastigotes of different evolutionary forms. A panel of 7 lectins were used. The binding specificity was analyzed by agglutination tests. DVL agglutinated 78% of L. amazonensis promastigotes from logarithmic phase culture and 52% from stationary phase, and therefore was selected for in vivo tests. Stationary phase promastigotes were incubated with DVL to evaluate if the agglutination was stage-specific and it was purified the agglutinated and non agglutinated fractions. Golden hamsters were infected with 106 promastigotes and grouped as: Agglutinated fraction (FA) (n=8); Non agglutinated fraction (FNA) (n=9); Control (CT) (n=8). The lesion size was measured over the course of 6 weeks. The parasite load of regional lymph node was quantified by limiting dilution and histopathological analysis of the lesions were performed on their paws. The lesions began at the third week in all groups. The lesionâs size was similar in all of them, except at the fourth and fifth weeks that FNA presented a transitory reduction (p<0,01). There were no significant differences concerning the parasite load and histopathologic changes among the groups. These data suggest that DVL did not select effectivelly infective forms of L. amazonensis, although it agglutinates promastigotes from the two culture growth phases.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:5391 |
| Date | 16 February 2012 |
| Creators | Juliana Montezuma Barbosa |
| Contributors | Margarida Maria de Lima Pompeu, Ãrika Freitas Mota, Francisco Vassiliepe Sousa Arruda, Maria do Livramento LeitÃo Vilar |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Patologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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