L’immunité innée est notre premier mécanisme de défense contre l’invasion des
pathogènes. Cette défense est basée sur la reconnaissance d’éléments invariables
des pathogènes par des récepteurs encodés dans les lignées germinales. Dans la
réponse anti-virale, le facteur de transcription Interferon Regulatory Factor 3
(IRF3) joue un rôle clé dans la réponse interféron de type I, combattant ainsi la
réplication virale et conférant un état anti-viral aux cellules infectées ainsi qu’aux
cellules avoisinantes. IRF3 est une protéine dont l’activation et la
phosphorylation sont régulées par les kinases TBK1 et IKKi. Nous proposons ici
que l’acétylation est une modification post-traductionnelle importante dans la
régulation de l’activité d’IRF3. Nous avons observé par immunobuvardage
qu’IRF3 est acétylé de façon basale et que cette acétylation est induite par la
présence du co-facteur CBP et est inhibée par la présence de la kinase TBK1. Par
spectrométrie de masse, nous avons ensuite identifié huit lysines sujettes à
l’acétylation sur IRF3. Aussi, par mutagénèse dirigée, nous avons muté de façon
ponctuelle chacun de ces sites et avons déterminé que la mutation de la lysine 87
inhibe la capacité d’IRF3 à s’attacher à l’ADN en EMSA et à transactiver son
élément de réponse en essai luciférase. Aussi, nous proposons que l’acétylation
masque la charge positive de la lysine 87 et contrôle de façon négative l’activité
du facteur de transcription IRF3. Notre groupe démontre ainsi pour la première
fois l’acétylation du facteur de transcription dans un modèle cellulaire et propose
que ce processus joue un rôle inhibiteur dans la régulation de la protéine. / Innate immunity is our first line of defense against invading pathogens. This
process is based on the recognition of invariable molecular patterns present on
different pathogens by germ-line encoded receptors. In the innate immune
response against invading viruses, the transcription factor Interferon Regulatory
Factor 3 (IRF3) plays a major role in the regulation of type I interferons, priming
the defense of infected and surrounding cells against viral infection. The
phosphorylation and activation of IRF3 is regulated by the kinases TBK1 and
IKKi. Here we suggest that acetylation is also an important post-translational
modification in the regulation of this transcription factor. We have observed by
immunoblot analysis a basal acetylation of IRF3, which is increased in the
presence of its co-factor CBP and inhibited in the presence of its kinase TBK1.
Also, we have identified on IRF3 eight different lysine residues subjected to
acetylation using mass spectrometry and we have mutated these sites using sitedirected
mutagenesis. We found that the K87R mutation inhibits IRF3-DNA
binding in EMSA and leads to the transactivation of its promoter in luciferase
assays. We also suggest that by masking the positive charge of the lysine 87
residue, acetylation negatively controls the activity of IRF3. Our group thus
demonstrates for the first time the acetylation of IRF3 in a cellular model and
suggests that this modification plays a role in the inhibition of the IRF3
transcription factor.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LACETR/oai:collectionscanada.gc.ca:QMU.1866/8549 |
| Date | 08 1900 |
| Creators | Wissanji, Tasheen |
| Contributors | Servant, Tasheen |
| Source Sets | Library and Archives Canada ETDs Repository / Centre d'archives des thèses électroniques de Bibliothèque et Archives Canada |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | Thèse ou Mémoire numérique / Electronic Thesis or Dissertation |
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