Les études sur la structure atomique des macromolécules biologiques ont été d'une grande importance en révélant des relations structurales et fonctionnelles d'enzymes, d'acides nucléiques et d'autres macromolécules dans divers systèmes biologiques. Dans la présente étude, la cristallogenèse et la cristallographie aux rayons X ont été utilisés pour déterminer la structure d'inhibiteur de protéinase A à une résolution atomique. Les inhibiteurs de protéinase A et B (API-A, -B) de la arrowhead, sont les deux principaux composés inhibiteurs qui sont purifiés à partir de la arrowhead (Sagittaria sagittifolia, Linn.). Ils sont des inhibiteurs à double tête multifonctionnels de diverses protéases. La structure du complexe ternaire de l'inhibiteur API lié à deux trypsines a été déterminée. Cependant, la structure tridimensionnelle de l'apoenzyme API-A est encore inconnue. A cet effet, la cristallogenèse de l’apoenzyme API-A a été réalisée. Après des étapes de purification et de cristallisation appropriées, des cristaux de l’apoenzyme API-A d’une qualité permettant la diffraction des rayons-X à haute résolution ont été obtenus en utilisant la méthode de diffusion de vapeur dans une goutte suspendue. Un ensemble complet de données de diffraction des rayons-X jusqu’à une résolution de 3,10 Å a été obtenu avec un crystal en forme de diamant, dont, le groupe d'espace a été déterminé comme étant P1. Ces données seront importantes pour comprendre la fonction d'API-A dans des systèmes biologiques. / Structural studies of biological macromolecules at atomic resolution have revealed many specific aspects of the structure/function relationships of the enzymes, nucleic acids and other macromolecules in biological systems. In the present study, protein crystallogenesis and X-ray crystallography were used to determine the structure of the protease inhibitor A at atomic resolution. The arrowhead protease inhibitors A and B (API-A, -B), are the two major inhibitor components which are purified from the tubes of arrowhead (Sagittaria sagittifolia, Linn.). Both API-A and API-B are double-headed multifunctional protease inhibitors. The ternary structure of the inhibitor API-A complex with two trypsins has been reported. However, the three-dimensional structure of the apoenzyme API-A is still unknown. In this regard, crystallogenesis of apoenzyme API-A was studied. After proper purification and crystallization steps, diffraction-quality crystals of the apoenzyme API-A were obtained, using the hanging drop vapor diffusion method. Moreover, a complete set of X-ray diffraction data was collected up to a resolution of 3.10 Å, using a diamond-shaped crystal whose space group was determined to be P1. These data will be important for understanding the function of API-A in biological systems.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LAVAL/oai:corpus.ulaval.ca:20.500.11794/26028 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Lin, Le Yi |
| Contributors | Lapointe, Jacques, Lin, Sheng-Xiang |
| Publisher | Université Laval |
| Source Sets | Université Laval |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 1 ressource en ligne (xvi, 84 pages), application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess, https://corpus.ulaval.ca/jspui/conditions.jsp |
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