Una de las principales causas de contaminación de los alimentos se encuentra
ligada a la presencia de hongos y a la producción de toxinas por parte de estos,
mayormente denominadas micotoxinas. Una de las más peligrosas es la ocratoxina
A (OTA), la cual debido a su alta toxicidad en el organismo ha generado que se
establezcan niveles máximos permisibles de consumo por parte de instituciones
internacionales.
En la actualidad, existen diversas metodologías que permiten la detección de esta
toxina. Sin embargo, no es fácil acceder a ellas pues requieren de personal
capacitado, equipos costosos y una alta demanda de tiempo. Este trabajo plantea el
desarrollo de un biosensor a base de nanovarillas de oro y aptámeros como una
alternativa en la detección de OTA, que sea más accesible que los métodos
convencionales.
En primer lugar, se realizó la síntesis de las nanovarillas de oro empleando el
método de semillas reportado por Ratto y colaboradores. De esta forma se obtuvo
varillas de aproximadamente 54 nm x 17 nm; las cuales fueron caracterizadas
mediante espectroscopía UV-Vis-NIR y microscopía electrónica de transmisión.
En segundo lugar, se implementó el proceso de funcionalización de las nanovarillas
de oro para el desarrollo del biosensor. Se optimizó el número de centrifugaciones y
la concentración del aptámero, y se utilizó como molécula de relleno al 2-
mercaptoetanol. En estas etapas, se monitoreó el desplazamiento y el ancho de la
banda plasmónica mediante UV-Vis-NIR y los cambios en los espectros Raman
para determinar las mejores condiciones de funcionalización.
En tercer lugar, se evaluó el desempeño del sensor con diferentes concentraciones
de la toxina (0, 0.25, 0.5, 2, 4 μM) por medio de espectroscopía UV-Vis-NIR y
espectroscopía Raman. Con esta última, se identificó las señales vibracionales
características tanto del aptámero como del 2-mercaptoetanol.
Finalmente, se empleó el método de calibración multivariante de mínimos cuadrados
parciales para construir un modelo de cuantificación de OTA a partir de los
espectros obtenidos. Se concluye que mediante espectroscopia Raman es posible
discernir hasta 0.25 μM (100 ppb) de la toxina; mientras que por espectroscopía UVVis-
NIR, solo es posible diferenciar a partir de 2 μM (800 ppb). / Tesis
| Identifer | oai:union.ndltd.org:PUCP/oai:tesis.pucp.edu.pe:123456789/12278 |
| Date | 10 July 2018 |
| Creators | Ayala Correa, Luis Jair |
| Contributors | Galarreta Asian, Luis Jair |
| Publisher | Pontificia Universidad Católica del Perú |
| Source Sets | Pontificia Universidad Católica del Perú |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | info:eu-repo/semantics/bachelorThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | Pontificia Universidad Católica del Perú, Repositorio de Tesis - PUCP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/restrictedAccess |
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