Normally present in water, soil and waste water, Acinetobacter baumannii has become an
important nosocomial pathogen, as causal agent of pneumonias, septicemias and urinary
tract infections, among other complications in compromised patients from hospital’s
intensive care units. One of its last acquired abilities is the resistance to colistin (polymixin
E), the last therapeutic option for its infections. In this thesis, descriptive and quantitative
differential expression proteomics is used in the study of acquired colistin resistance. As
result of this research, 1,097 proteins belonging to the Acinetobacter genus have been
identified by combined application of bidimensional gel electrophoresis (2DE), differential
gel electrophoresis (DIGE), and peptide labeling with stable isobaric isotopes tags
(iTRAQ). Analyses have been performed on the global expressed proteome of a reference,
colistin-sensible strain (A. baumannii ATCC 19606) and, for comparative purposes, on a
derived strain on which colistin resistance has been induced in vitro. The resistant
phenotype shows reduced fitness, with significant differences in expression found in outer
membrane proteins, membrane active transporters, diverse metabolic enzymes (fatty acids,
citrate, phenylacetate, piruvate and nitrogen), proteins involved in stress response and
biofilm formation, as well as in protein synthesis and folding pathways. The work has
allowed to assess the strengths and weaknesses of the different techniques currently used in
this type of proteomic analysis. / Acinetobacter baumannii, normalmente aislado en suelos y aguas (corrientes o residuales), se
ha convertido en importante patógeno nosocomial, siendo agente causal de, entre otras
complicaciones, neumonías, septicemias e infecciones del tracto urinario de pacientes
comprometidos en unidades hospitalarias de cuidados intensivos. La más reciente de sus
capacidades adquiridas es la resistencia a colistina (polimixina E), antibiótico peptídico
considerado la última opción terapéutica en contextos clínicos. Esta tesis doctoral emplea la
proteómica descriptiva y de expresión diferencial cuantitativa para investigar la resistencia
adquirida por A. baumannii a dicho antibiótico. Los resultados han supuesto la
identificación de 1.097 proteínas de Acinetobacter mediante el empleo combinado de
electroforesis bidimensional convencional (2DE), 2DE diferencial (DIGE) y marcaje
peptídico mediante isótopos isobáricos estables (iTRAQ). Los análisis se han realizado en
el proteoma expresado por una cepa de referencia sensible a colistina (A. baumannii ATCC
19606), así como en una cepa derivada de ésta en la que se ha inducido, a efectos
comparativos, resistencia a colistina in vitro. El fenotipo resistente manifestó reducida
adaptabilidad biológica, encontrándose las principales diferencias en la estructura de la
membrana externa, en la expresión de transportadores activos de membrana, en diversos
enzimas metabólicos (ácidos grasos, citrato, fenilacetato, piruvato, nitrógeno) y de
respuesta a condiciones de estrés, así como en la expresión de proteínas participantes en la
formación de biopelículas y en el proceso de síntesis y plegamiento de proteínas. Además,
el trabajo ha permitido evaluar los puntos fuertes y débiles de las técnicas empleadas
actualmente en este tipo de análisis proteómicos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:TDX_UPF/oai:www.tdx.cat:10803/31820 |
| Date | 07 October 2010 |
| Creators | Rodríguez Falcón, Manuel |
| Contributors | Andreu Martínez, David, Universitat Pompeu Fabra. Departament de Ciències Experimentals i de la Salut |
| Publisher | Universitat Pompeu Fabra |
| Source Sets | Universitat Pompeu Fabra |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis, info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
| Format | 395 p., application/pdf |
| Source | TDX (Tesis Doctorals en Xarxa) |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess, ADVERTIMENT. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs. |
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