Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / La periodontitis es una enfermedad infecciosa multifactorial, caracterizada
por una respuesta inflamatoria exacerbada que produce la destrucción de las
estructuras que dan soporte al diente, incluyendo la encía, el ligamento
periodontal, el cemento radicular y el hueso alveolar. Para la iniciación de las
periodontitis, se requiere la presencia de una comunidad bacteriana subgingival
compleja en la cual coexisten diversos géneros y especies microbianas. Dentro de
las especies del complejo rojo de Socransky que contribuyen a la etiología de la
enfermedad periodontal, está Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis). P.
gingivalis es una bacteria Gram negativo que tendría especial relevancia en la
progresión de la periodontitis. Entre los factores de virulencia de P. gingivalis se
encuentran el lipopolisacárido (LPS), las fimbrias y el antígeno K o cápsula, los
cuales están involucrados en el proceso de infección. La expresión de estos
factores de virulencia por parte de la bacteria, puede variar de manera importante
entre individuos, generando una respuesta distinta en los tejidos infectados, como
en células epiteliales gingivales. Se ha descrito que P. gingivalis puede invadir las
células epiteliales de la encía y modular diferentes vías de señalización que
generen inhibición de la activación del sistema inmune e inhibición de la apoptosis
celular.
En este trabajo, se evaluaron características de la envoltura celular, y
propiedades macro y microscópicas de aislados clínicos de P. gingivalis y cepas
de referencia, y se evaluó su efecto sobre la viabilidad de células epiteliales
gingivales.
De esta manera, se analizaron parámetros macromorfológicos de las cepas
en medios sólido y líquido. Se evaluó la capacidad de formación de biopelículas, la
carga superficial (mediante ensayos de unión a citocromo C y ensayos de
hidrofobicidad), se estudió la presencia de cápsula (tinción con tinta china) y
caracterizó los perfiles electroforéticos del LPS. Finalmente, se estudió la
viabilidad y el nivel de apoptosis de células epiteliales gingivales infectadas por
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dos cepas virulentas de referencia y 7 aislados clínicos de P. gingivalis, utilizando
la línea celular OKF6/TERT2. Estos ensayos fueron realizados en tiempos
tempranos, intermedios y tardíos de infección.
Nuestros resultados mostraron diferencias en el crecimiento entre
aislados clínicos de individuos sanos comparados con enfermos, tanto en
medio sólido como en medio líquido. En la mayoría de los aislados clínicos se
observó presencia de cápsula. Además, todos formaron más biopelículas que
las cepas de referencia, y no se encontraron diferencias significativas entre las
muestras de pacientes sanos y enfermos. Adicionalmente, la mayoría de los
aislados clínicos presentó una mayor carga superficial que las cepas de
referencias. Nuestros resultados también mostraron que todos los aislados
clínicos y cepas de referencia de P. gingivalis fueron capaces de invadir células
OKF6/TERT2. Adicionalmente, observamos que algunos aislados clínicos
aumentaron significativamente la viabilidad celular a tiempos tempranos y
tardíos de infección, incluso más que la cepa W50 descrita como una cepa muy
virulenta y altamente invasiva.
En síntesis, nuestros resultados indican que existen diferencias
macromorfológicas y de envoltura celular entre aislados clínicos de P. gingivalis
provenientes de individuos sanos y enfermos y que la infección por P. gingivalis
mantiene o aumenta la viabilidad en la línea celular derivada de epitelio gingival
OKF6/TERT2, como consecuencia de la modulación de la apoptosis. También,
observamos que éste fenómeno es dependiente de la virulencia de la cepa. La
virulencia se relaciona con características de la envoltura celular y con la
presencia de ciertos componentes específicos. Estos aislados clínicos más
virulentos podrían estar asociados a cuadros clínicos más agresivos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UCHILE/oai:repositorio.uchile.cl:2250/130110 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Bugueño Valdebenito, Isaac Maximiliano |
| Contributors | Bravo Rodríguez, Denisse Margarita, Facultad de Odontología., Departamento de Patología, Pérez Donoso, José, Abusleme Ramos, Loreto Andrea, Hoare Teuche, Anilei Paz, Dutzan Muñoz, Nicolás |
| Publisher | Universidad de Chile |
| Source Sets | Universidad de Chile |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | Tesis |
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