Orientador: Maria Célia Bertolini / Banca: Cleslei Fernando Zanelli / Banca: Julio Cesar Borges / Resumo: Neste trabalho foi realizado um estudo de caracterização das proteínas RUV - 1 e RUV - 2 de Neurospora crassa, as quais são proteínas ubiqua mente encontradas e descritas estar envolvidas em diferentes processos celulares. Resultados anteriores obtidos pelo nosso grupo identificaram, através de espectrometria de massas, a proteína RUV - 1 como uma proteína capaz de se ligar ao promotor do gene da glicogênio sintase ( gsn ) durante a resposta ao choque térmico. Mais tarde, foi demonstrado que a proteína foi capaz de se ligar in vitro, e de maneira especifica, a o motivo de DNA STRE, também presente no promotor gsn . Considerando que a proteína RUV - 1 in terage com a proteína parceira RUV - 2 e, juntas, participam de grandes complexos proteicos que atuam na regulação de diferentes processos celulares, e ste trabalho teve como objetivo realizar estudos de caracterização das proteínas RUV - 1 e RUV - 2. Os resultad os de expressão gênica mostraram que o gene ruv - 1 foi s uperexpresso na condição de choque térmico e que o gene ruv - 2 n ão mostrou alteração na expressão na mesma condi ção. Além disso, foi demonstrado que o transcrito do gene ruv - 2 é parcialmente processado n a situação de choque térmico, e não em outra condição indutora de estresse, através do processo conhecido como intron retention levando à síntese de uma proteína truncada . No entanto, os resultados mostraram que a proteína RUV - 2 foi detectada em extratos celulares do fungo obtidos até 4 h de choque térmico. Os cDNAs ( ruv - 1 e ruv - 2 ) foram inserido s no vetor pET28a e as proteínas expressas em E. coli . Entretanto, ainda não foi finalizada a expressão de ambas utilizando o plasmídeo bicistrônico pETDUET - 1, par a a análise de interação de ambas proteínas. Neste trabalho também foi construída uma linhagem do fungo modificada geneticamente, a qual produz a proteína RUV -... / Abstract: In this work, we performed characterization studies of Neurospora crassa RUV - 1 and RUV - 2, which are ubiquitous protein and have been described to be involved in different cellular processes. Previous results obtained by our group identified, by mass sp ectrometry, RUV - 1 as a protein able of binding to the glycogen synthase gene promoter ( gsn ) during heat shock response. Later, it was demonstrated that the protein was able to bind in vitro, and in a specific manner, to the STRE DNA motif, also present in gsn promoter. Since RUV - 1 interacts with RUV - 2 protein, and together participate in large protein complexes that act in the regulation of different cellular processes, this study aimed to conduct characterization studies of RUV - 1 and RUV - 2 proteins . G ene expression results showed that ruv - 1 gene, but not ruv - 2 gene was overexpressed under heat shock. Furthermore, it was shown that ruv - 2 transcript was incompletely processed under heat shock through a process known as intron retention that leads to the prod uction of a truncated protein. No other stress inducing condition s led to the same phenomenon . However, RUV - 2 protein was detected in cell extracts of the fungus exposed to heat shock up to 4 h . The c DNA c ( ruv - 1 and ruv - 2 ) w ere inserted into the pET28a vec tor and the proteins were expressed in E. coli . However, it has not yet been completed the molecular cloning in the bicistronic plasmid pETDUET - 1, which allows the production of both proteins in the same cell, what is required for protein - protein interacti on analysis. In t his work, was also constructed a genetically modified strain, which produces the V5 - tagged RUV - 1 protein (V5 - RUV - 1 ), which that will be later used in immunoprecipitation assay for the identification of partner proteins. Chromatin immunopre cipitation (ChIP) assay using this strain w as performed in order to investigate... / Mestre
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UNESP/oai:www.athena.biblioteca.unesp.br:UEP01-000866342 |
| Date | January 2016 |
| Creators | Acera Mateos, Pablo. |
| Contributors | Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" Instituto de Química. |
| Publisher | Araraquara, |
| Source Sets | Universidade Estadual Paulista |
| Language | Portuguese, Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | text |
| Format | 88 f. : |
| Relation | Sistema requerido: Adobe Acrobat Reader |
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