En bakteriell ledinfektion kallas för septisk artrit och utan snabb behandling kan tillståndet leda till irreversibla ledskador och flera allvarliga komplikationer. Snabb diagnostik är viktigt för en god prognos och med nuvarande metod för odling av ledvätska tar det upp till fem dygn för detektion av mikroorganismer. Metoden inkluderar odling på fasta substrat och i blododlingsflaskor. Med en ny metod som använder multiplex PCR (polymerase chain reaction) skulle analystiden kunna minskas till en timme. BioFire Joint Infection (JI) Panel är ett test som kan detektera flera mikroorganismer samtidigt genom amplifiering av DNA. Mikroorganismer detekteras och identifieras genom cellysering, DNA-rening, PCR-reaktioner i två steg och smältanalys. Syftet med arbetet var att utvärdera BioFire JI Panel för detektion av mikroorganismer i ledvätska och jämföra metodens känslighet med standardiserad odling respektive odling i buljong, och svara på frågeställningen hur känslig JI-panelen är jämfört med standardiserad odlingsmetod. Prov konstruerades genom att suspendera målbakterierna Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Streptococcus pyogenes, Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, Kingella kingae och Finegoldia magna i natriumklorid. Suspensionerna seriespäddes och odlades ut på fasta substrat, inokulerades i blododlingsflaskor och buljonger samt analyserades med JI-panelen för att identifiera metodernas detektionsgränser. Fasta substrat, blododlingsflaskor och buljonger visade likvärdig känslighet för majoriteten av bakterieisolaten medan JI-panelen generellt visade en sämre eller likvärdig känslighet i jämförelse med standardmetod. Panelen visade potential för detektion av svårodlade bakterier och skulle vara ett bra komplement till nuvarande odlingsmetod. Ytterligare studier hade behövts men den snabba analystiden som möjliggör snabbare behandling framhävde metodens kliniska potential. / Bacterial joint infections are called septic arthritis and without rapid diagnosis and treatment the condition could lead to irreversible joint damage and other serious complications. With the current method for synovial fluid cultivation, which includes both solid substrates and culture vials, detection of microorganisms takes up to five days. With a new method utilizing multiplex polymerase chain reaction (PCR), the time to detection could decrease to an hour. BioFire Joint Infection (JI) Panel can detect multiple microorganisms simultaneously through amplification of DNA. Microorganisms are detected and identified by cell lysis, DNA purification and two consecutive PCR reactions with subsequent melting curve analysis. The aim of the study was to evaluate the BioFire JI Panel for detection of microorganisms in synovial fluid and compare the method’s sensitivity to standard and broth cultivation. Samples were constructed by suspending target bacteria, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Streptococcus pyogenes, Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, Kingella kingae and Finegoldia magna, in sodium chloride. The suspensions were serially diluted and cultivated on solid substrates, in culture vials, broth and analyzed with the JI panel to find the detection limits for each method. Solid substrates, culture vials and broth exhibited similar sensitivity while the JI panel generally had a lower or similar sensitivity compared to standard methods. The panel showed potential detecting difficult to grow bacteria and would be a good complement to current methods. Further studies are required but the quick analysis enabling faster treatment highlighted the clinical potential.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:lnu-121373 |
| Date | January 2023 |
| Creators | Bengtsson, Tilda |
| Publisher | Linnéuniversitetet, Institutionen för kemi och biomedicin (KOB) |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | Swedish |
| Detected Language | Swedish |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0027 seconds