Le glutathion (GSH et GSSG) joue un rôle prédominant dans l apoptose (mort cellulaire programmée) un phénomène déficient dans certains cas de cancer. L action du glutathion est étroitement liée à plusieurs protéines qui ont une affinité pour ce tripeptide ( Glu-Cys-Gly sous sa forme réduite) et qui constituent le système du glutathion. Une méthode de marquage par photoaffinité n utilisant pas de radioisotopes a été choisie pour identifier ces nouvelles protéines. Pour cela nous avons synthétisé de nouvelles sondes photoactivables dont le but est de se lier à différentes molécules biologiques notamment, dans notre cas, le glutathion. L irradiation de ce matériel biologique en présence de ces sondes photoactivables va permettre la formation d une liaison covalente entre les protéines ayant une affinité pour le glutathion et le glutathion lui-même. L étape suivante qui consiste en une ligation de Staudinger avec la biotine ou en une réaction de Click Chemistry avec une biotine modifiée, va permettre la visualisation et l identification de ces protéines cibles ainsi que de leur site de liaison. Deux méthodes de détection ont été envisagées¡: - La chimiluminescence : la présence de la biotine permet une détection aisée via une procédure bien connue qui utilise le complexe streptavidin-peroxydase et le luminol - La fluorescence : le couplage d un composé fluorescent à la sonde permet une détection. / Glutathione (GSH and GSSG) takes a predominant part in apoptosis (programmed cell death), a process which is deficient in many cancers. The action of glutathione is closely related to the activity of several proteins having an affinity for the tripeptide ( Glu-Cys-Gly when reduced) and which are constituting the so-called glutathione system. A radioisotope-free photoaffinity labeling method was chosen for the identification of novel glutathione-binding proteins. We prepared news photoaffinity probe which can be connected to different biological molecules including, in our case, glutathione. Irradiation of a biological sample with this probe should lead to the formation of a covalent bond with proteins having an affinity for GSH. In a second step, a Staudinger ligation with biotin or a Click Chemistry reaction with modified biotin should allow the visualization and identification of the target proteins and the binding sites. Two detection methods are envisaged: - Chemiluminescence : the presence of biotin can be easily detected by a well known procedure using streptavidin-peroxydase and luminol - Fluorescence : coupling the probe with a fluorescent com
| Identifer | oai:union.ndltd.org:theses.fr/2008METZ025S |
| Date | 03 September 2008 |
| Creators | Chenot, Elodie-Denise |
| Contributors | Metz, Comel, Alain |
| Source Sets | Dépôt national des thèses électroniques françaises |
| Language | French |
| Detected Language | French |
| Type | Electronic Thesis or Dissertation, Text |
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