Mestrado em Medicina e Oncologia Molecular / Master Degree Course in Molecular and Oncology Medicine / Os tumores mamários espontâneos são as neoplasias mais frequentes na cadela,
possuindo uma elevada heterogeneidade biológica e histomorfológica.
Aproximadamente metade de todos os tumores mamários em cães são malignos,
apresentando um elevado potencial de metastização para nódulos linfáticos ou outros
órgãos, como, por exemplo, o pulmão.
A transformação maligna está associada a uma glicosilação anormal, o que
resulta na síntese e expressão alterada de determinantes de carbohidratos.
Grande parte da investigação em humanos sobre cancro da mama é efectuada em
linhas celulares estabelecidas de carcinoma da mama, como modelos in vitro, uma vez
que têm a capacidade de proliferar indefinidamente. Contudo, tendo em conta que a
interacção entre o tumor e o organismo deve ser considerada, subsiste a necessidade de
confirmação dos resultados em modelos animais.
De forma a aprofundar o conhecimento da biologia dos tumores da mama de
cadela, foram estabelecidos dois modelos experimentais, um in vitro e outro in vivo.
Na primeira parte do trabalho, foram estabelecidas três linhas celulares de
tumores mamários caninos um adenoma e dois carcinomas complexos partindo de
fragmentos de tumores colhidos, no acto da cirurgia. Observou-se a presença de células
do tipo epitelial e mioepitelial, após imunomarcação in vitro para os filamentos
intermediários. Após a heterotransplantação destas linhas celulares em ratinhos nude,
verificou-se que elas não eram tumorigénicas.
Numa segunda parte do trabalho, foi feita a caracterização in vitro e in vivo de
uma linha celular previamente estabelecida, derivada de um carcinoma ductal
infiltrativo de mama de cadela. As células aderem ao fundo do frasco como uma fina
monocamada, possuem um tempo de duplicação de 32,6±1,4 horas e, quando crescem
em agar, formam um agregado único e volumoso. Os ensaios de mobilidade celular
mostraram que estas células conservam a sua arquitectura tipo célula epitelial e têm a
capacidade de se mover entre as duas margens de uma lesão artificial de forma
compacta e unidireccional. Estas células apresentam imunoreactividade para a
E-caderina e um índice de proliferação elevado. Um painel de anticorpos para os
filamentos intermediários foi usado para determinar a origem da linha celular,
observando-se uma intensa imunoreactividade para a citoqueratina AE1/AE3,
característica das células epiteliais. A CK14 é expressa em 25-50% das células e a
vimentina também apresenta um elevado nível de expressão, que se encontra descrito
como normal em células em cultura. Estas células têm também imunomarcação para os
carbohidratos sLex, Lex e Lea, podendo esta expressão aberrante ter um papel
fundamental nos mecanismos de metastização à distância, facilitando a interacção
positiva com o órgão alvo e mostrar-se relevante como marcador tumoral de
prognóstico.
Ensaios in vivo demonstraram que estas células cresciam quando inoculadas
subcutaneamente no panículo da glândula mamária de ratinhos nude fêmeas. As massas
tumorais eram histologicamente idênticas às lesões tumorais da mama de onde
derivavam e, quando os tumores heterotransplantados foram colocados em cultura, a
expressão dos filamentos intermediários e dos carbohidratos não se alteraram. De forma
a identificar os tecidos metastáticos alvo, foi feita a injecção endovenosa na veia caudal
dos ratinhos, observando-se metastização para os nódulos linfáticos, pulmão, coração,
baço, rim e fígado. A tumorigenicidade e metastização observada nos ratinhos nude,
bem como a mobilidade da linha celular in vitro, propõem um fenótipo agressivo para
estas células.
De uma forma geral, os resultados obtidos neste trabalho sugerem que os
tumores mamários caninos constituem um excelente modelo para o estudo do cancro da
mama humano. / Spontaneous mammary tumors are the most common neoplasia in the female
dog and have a high biological and histomorphological heterogeneity. Approximately
one-half of all mammary tumors in dogs are malignant and have a great potential to
metastasize to the regional lymph nodes or other organs such as the lungs.
Malignant transformation is associated with abnormal glycosylation, resulting in
the synthesis and expression of altered carbohydrates determinants.
In humans, the majority of breast cancer research is conducted using established
breast cancer cell lines as in vitro models because they have the ability to proliferate
indefinitely. However, the interaction between the tumor and the host organism must be
taken into consideration, so the results need to be confirmed using animal models.
In order to have an in depth view of the biology of canine mammary tumors, two
experimental models, one in vitro and another in vivo, were established.
In the first part of this work, three canine mammary carcinoma cell lines were
established - one complex adenoma and two complex carcinomas - using fragments of
tumors excised during a surgical procedure performed on a female dog. After the in
vitro immunostaining for intermediate filaments, the presence of epithelial and
mioepithelial cells was determined. When these cell lines were heterotlansplanted in
nude mice it was noted that they were not tumorigenic.
In the second part of the work an in vitro and in vivo characterization of a
previously established cell line was made, derived from a canine mammary ductular
carcinoma. These cells adhered to the bottom of the flask as a compact thin monolayer,
had a doubling time of 32,6±1,4 hours and when they were grown in agar they formed a
unique large aggregate. Cell motility assay showed that these cells conserved an
epithelial-like architecture and had the ability to move between the edges of an artificial
wound in a compact front of migration, with the cells moving unidirectionally. These
cells had immunoreactivity for E-cadherin and showed a high proliferative index. A
panel of antibodies for intermediate filaments was used to evaluate the origin of the cell
line and it showed intense immunoreactivity for AE1/AE3 keratin which is a
characteristic feature of epithelial cells. CK14 was expressed in 25-50% of the cells and
vimentin also showed a high level of expression, which can be normal in culture tissues.
These cells also immunostained for the carbohydrates sLex, Lex and Lea, and this
aberrant expression may also play a fundamental role in the molecular mechanisms of
metastization to distant organs, facilitate positive interactions within the target organ
and could be useful as a prognostic tumour marker.
In vivo assays showed that these cells grew when inoculated subcutaneously in
the mammary fat pad of female nude mice. Tumour masses were histologically identical
to the mammary tumour lesions they derived from, and when heterotransplanted
tumours were cultured, the expression of intermediate filaments and carbohydrates was
not altered. To look for metastatic target tissues we performed an intravenous injection
in the tail vein of the mice. These cells metastasized to lymph nodes, lungs, heart,
spleen, kidney and liver. The tumorigenicity and metastization observed in nude mice,
as well as the motility of this cell line in vitro are suggestive of an aggressive phenotype
for these cells.
On the whole, the results obtained from this work suggest that canine mammary
tumours are good models for the study of human breast cancer.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:up.pt/oai:repositorio-aberto.up.pt:10216/22097 |
| Date | 11 December 2007 |
| Creators | Gomes, Joana Neto Cunha |
| Publisher | Faculdade de Medicina da Universidade do Porto, FMUP |
| Source Sets | Universidade do Porto |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | Dissertação |
| Format | application/pdf, application/pdf, application/pdf, application/pdf |
| Rights | openAccess |
Page generated in 0.004 seconds