Η σύγχρονη παραγωγή φαρμακευτικών και άλλων χημικών ουσιών και ο
αναγκαίος τοξικολογικός τους έλεγχος επιφέρει την χρήση ενός μεγάλου αριθμού
πειραματοζώων με αποτέλεσμα την αύξηση του κόστους αλλά και την έγερση
ζητημάτων που σχετίζονται με την ασφάλεια και την βιοηθική. Στην βάση αυτού του
προβληματισμού η ανάπτυξη νέων in vitro δοκιμασιών κυτταρο-τοξικότητας με
δυνατότητα ακριβέστερης πρόβλεψης των αρχικών δόσεων οξείας από του στόματος
τοξικότητας, προβάλλει ως αναγκαιότητα στις μέρες. Μέχρι τώρα έχουν
χρησιμοποιηθεί σε in vitro δοκιμασίες μετασχηματισμένα, αθανατοποιημένα ή
πρωτογενή κύτταρα καθώς και εμβρυικά βλαστικά κύτταρα (hESCs). Επίσης
πρόσφατα χρησιμοποιήθηκαν μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα από τον μυελό των
οστών (BM-hMSCs). Τα κύτταρα αυτά ωστόσο παρουσιάζουν μειονεκτήματα που
σχετίζονται με την δυσκολία απομόνωσης τους, την ετερογένεια τους, αλλά και τον
πρόωρο φαινότυπο γήρανσης κατά την καλλιέργεια τους.
Σε αυτή την μελέτη διερευνάται για πρώτη φορά η χρήση των βλαστικών
κυττάρων της γέλης του Wharton (WJSCs) του ομφαλίου λώρου σε in vitro
δοκιμασία κυτταροτοξικότητας. Τα κύτταρα αυτά παρουσιάζουν σημαντικά
πλεονεκτήματα σε σχέση με άλλα μεσενχυματικά κύτταρα καθώς: απομονώνονται
εύκολα, καλλιεργούνται εκτεταμένα με διατήρηση των βλαστικών τους ιδιοτήτων,
δεν εγείρουν ηθικά ζητήματα για τη χρήσή τους, παρουσιάζουν γενετική και
φαινοτυπική σταθερότητα και ήπιο ανοσολογικό προφίλ. Στην παρούσα μελέτη
εξετάστηκαν παράλληλα και συγκριτικά με τα κύτταρα της γέλης του Wharton, οι
κυτταρικές σειρές HepG2 (ηπατικού καρκινώματος) και NIH 3T3 (ινοβλάστες
ποντικού) αλλά και τα μεσεγχυματικά κύτταρα λίπους AD-hSCs. Όπως προτείνεται
από το πρωτόκολλο της ICCVAM δοκιμάστηκαν 12 ουσίες αναφοράς ενώ η μέτρηση
της επιβίωσης των κυττάρων έγινε με την δοκιμασία MTS και NRU. Τα
αποτελέσματα μας δείχνουν ότι τα κύτταρα της γέλης του Wharton μπορούν να
αποτελέσουν αξιόπιστο και ελπιδοφόρο μοντέλο για δοκιμασίες in vitro τοξικότητας.
Το μοντέλο αυτό μπορεί να λειτουργήσει συμπληρωματικά, ή ακόμα και να
ξεπεράσει, ήδη επικυρωμένα μοντέλα κυτταροτοξικότητας . / The modern production of pharmaceuticals, other chemicals and their required
toxicological controls results in the use of a large number of laboratory animals
leading in increased costs as well as raising questions considering safety and
bioethics. Alternatively, in vitro cytotoxicity assays are highlighted with the ability of
a more accurate prediction of the starting dose of oral acute toxicity. Occasionally
several cell lines have been used including transformed and immortalized cells or
primary cells and embryonic stem cells (hESCs). For the same purpose adult
mesenchymal stem cells derived from the bone marrow (BM-hMSCs) have been
recently used but they exhibit difficulties in their isolation, heterogeneity, and
premature senescence phenotype during their sub-cultivation.
In this study for the first time we investigated the use of mesenchymal stem
cells (WJSCs) isolated from fetal umbilical cord, in particular from the Wharton’s
Jelly. These cells exhibit the advantage of easily being isolated and cultured in large
quantities without ethical issues, genetic and phenotypic stability and subimmunological
profile. Two different cell lines HepG2 (liver carcinoma) and NIH
3T3 (mouse fibroblasts) and mesenchymal adipose-derived stem cells AD-hSCs have
been used and compared with the WJSCs in parallel. 12 substances have been tested
for their cytotoxicity effect on cell survival using the MTS assay as suggested by
ICCVAM. Our results indicate that this model is a reliable and promising approach
for in vitro cytotoxicity tests on human cells and it can complement or even overpass
validated cytotoxicity models.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:upatras.gr/oai:nemertes:10889/8539 |
| Date | 25 May 2015 |
| Creators | Κρητικός, Ανδρέας |
| Contributors | Σωτηροπούλου, Γεωργία, Kritikos, Andreas, Σωτηροπούλου, Γεωργία, Ζουμπουρλής, Βασίλειος, Αντιμησιάρη, Σοφία |
| Source Sets | University of Patras |
| Language | gr |
| Detected Language | Greek |
| Type | Thesis |
| Rights | 0 |
| Relation | Η ΒΚΠ διαθέτει αντίτυπο της διατριβής σε έντυπη μορφή στο βιβλιοστάσιο διδακτορικών διατριβών που βρίσκεται στο ισόγειο του κτιρίου της. |
Page generated in 0.0027 seconds