Από 3 πρότυπα στελέχη Pseudomonas aeruginosa το Smooth
στέλεχος PAC-IR και τα Rough στελέχη PAC-557 και PAC-605,
που δώρησε ευγενώς στο Εργαστήριο Μικροβιολογίας του
Πανεπιστημίου Πατρών η Dr. ΡΜ Meadow του University
Co 1 lege, London παρελήφθησαν με ειδική μεθοδολογία ο
λιποπολυσακχαρίτης L.P.S, η εξωκυττάρια ουσία (Slime) και
οι εξωτερικές μεμβράνες.
Έγιναν ηλεκτροφορήσεις με αποδιατακτικούς παράγοντες
(SDS-PAGE) και χρώση των πηκτωμάτων για πρωτεΐνες με
Coomassie blue, και για L.P.S με AgNÖ3.
Οι ηλεκτροφορητικές εικόνες του Slime, του L.P.S και
των εξωτερικών μεμβρανών διαφέρουν μεταξύ τους και στα 3
στελέχη.
Ανάλυση των ουδετέρων σακχάρων έδειξε ότι και τα 3
Slime περί έχουν με ποσοτικές διαφορές 6 σάκχαρα, τη
ραμνόζη, τη φουκόζη, τη ξυλόζη, τη μαννόζη και τη
γαλακτόζη. Αντίθετα μαννόζη και γαλακτόζη δεν περιέχονται
στο Smooth L.P.S, ενώ οι Rough L.P.Ss περί έχουν μόνο
ραμνόζη και γλυκόζη.
Ανάλυση του λιπιδικού στοιχείου των 3 Slime και των 3
L.P.Ss έδειξε ότι ποιοτικά περιέχουν 5 ίδια λιπαρά οξέα.
Δωδεκανοικό οξύ (~Cii), 20Η-δωδεκανοικό (-Ci?),
δεκατετρανικό οξύ (~Ci 4), δεκαεξανικό οξύ (~Cit),
δεκαοκτανικό οξύ (-Ci s) και τα ισομερή του. Μετά από χρωματογραφία μοριακής διήθησης στα 3 Slime
ο πολυσακχαρίτης που παραλαμβάνεται από την υδατανθρακική
κορυφή δεν περιέχει L πρωτεΐνη και είναι μοριακού βάρους
40.000-100.000 daltons.
Τα αποτελέσματα αυτά αποδεικνύουν ότι η παραγωγή του
Slime είναι κοινή ιδιότητα Smooth και Rough στελεχών
Ρ.aeruginosa και ότι το υδατανθρακικό στοιχείο του Slime
είναι αυτοτελής ουσία, ελεύθερη πρωτεϊνών, που δεν
αποτελείται από τις πλευρικές αλυσίδες του L.P.S. / Lipopolysaccharide (L.P.S), slime and outer membranes
were obtained from a smooth, nonmucoid Pseudomonas
aeruginosa strain, PAC-IR and its two rough mutants, PAC~
557 and PAC-605 (Kindly provided by Dr. PM Meadow, University
College, London).
Electrophoretic analysis on SDS-polyacrylamide gels
and staining with silver nitrate and Coomassie blue showed
different profiles between L.P.S, Slime and outer
membranes in all three strains. Comparative analysis of
the saccharide moiety between L.P.S and Slime of each
strain by H.P.L.C demonstrated that the saccharide moiety
of slime has different composition from that of L.P.S.
Six neutral sugars, rhamnose, fucose, xylose, mannose,
galactose and glucose were identified in all three slimes
though in different amounts. Mannose and galactose were
not found in the smooth L.P.S, whereas only rhamnose and
glucose were identified in the L.P.Ss of the rough
strains.
Comparative analysis of the lipid moiety between L.P.S
and Slime in all three strains with Gas Chromatography and
Mass Spectroscopy indicated that lipid moiety had no quaiitative differences concerning the lipid acids. Five
lipid acids were identified in all three slimes and L.P.Ss
dodecanoic acid (~Ci2)> 20H~dodecanoic acid (-C2?),
tetradecanoic (-C14), exadecanoic (Ci(,), octadecanoic (-
Cis) and its isomeric forms.
After gel filtration of all three slimes the polysaccharide
obtained from the carbohydrate peak fraction was
found to be protein free. By gel filtration the mo 1 ecular
size of the polysaccharide was estimated to be about
40000-100000 daltons. Whether the polysaccharide moiety is
a glycolipid is not clear at the present. This problem is
currently under investigation.
Our results suggest that slime production is a common
property shared by both Smooth and Hough Ρ.aeruginosa
strains. The saccharide moiety of slime does not represent
the side chains of L.P.S and it is protein free.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:upatras.gr/oai:nemertes:10889/8834 |
| Date | January 1989 |
| Creators | Χριστοφίδου-Πλιάκα, Μυρτώ |
| Contributors | Δημητρακόπουλος, Γεώργιος, Christofidou-Pliaka, Myrto, Μανιάτης, Γεώργιος, Μίντζας, Αναστάσιος, Βαγενάκης, Απόστολος, Μαραγκουδάκης, Μιχαήλ |
| Source Sets | University of Patras |
| Language | gr |
| Detected Language | Greek |
| Type | Thesis |
| Rights | 0 |
Page generated in 0.0023 seconds