O principal objetivo deste trabalho foi estabelecer, através da definição da dose TD50 (concentração que causa a morte de 50% das células) uma escala de toxicidade dentre diversas substâncias comumente utilizadas em pulpotomias de dentes decíduos. Foram utilizadas como substâncias-teste o formocresol concentrado (FC), formocresol diluído a 1:5 (FCD), solução de sulfato férrico a 15,5% (SF), hidróxido de cálcio P.A. (HC) e o agregado trióxido mineral (MTA). Fibroblastos Balb-c 3T3 foram semeados em placas de cultura de 24 poços na concentração de 3x104 células por poço. Diluições variadas dos extratos das substâncias-teste, obtidos de acordo com normas da ISO 10993-12, foram colocadas em contato com as células por 24 horas para a determinação da TD50, dose tóxica para 50% das células quando comparadas com grupo controle negativo (células não expostas aos extratos). Os ensaios colorimétricos de redução do MTT e captação do corante Vermelho Neutro foram realizados na TD50 das substâncias-teste. O tratamento estatístico dos resultados foi feito através dos testes de Análise de Variância (ANOVA), Dunnet e Bartlett, com p<0,05. Baseado na definição da TD50, pode ser estabelecida uma escala de citotoxicidade em ordem decrescente, a saber: FC>FCD>SF>HC>MTA. Os ensaios para a determinação da capacidade de redução do MTT e incorporação de VN demonstraram que a citotoxicidade dos materiais afeta, primordialmente, a função mitocondrial em detrimento do efeito mais discreto na integridade da membrana. Concluímos que a determinação da dose TD50 utilizando a metodologia proposta pela ISO 10993-12 permite o estabelecimento de uma escala de potência adequada para a ordenação de compostos terapêuticos em função de sua toxicidade. Esta padronização poderá facilitar a comparação entre diversos materiais auxiliando na investigação de novas drogas. Ainda, é possível concluir que os materiais testados e utilizados para a pulpotomia de dentes decíduos têm sua toxicidade mediada principalmente por alterações da função mitocondrial das células. / The main purpose of this study was to define a rank of In vitro toxicity of primary teeth pulpotomy agents, based on MTT and Neutral Red colorimetric essays, and on the definition of the TD50 for each substance tested. Buckleys formocresol (FC), 20% diluted formocresol (FCD), calcium hydroxide P.A. (HC), 15,5% ferric sulfate solution (SF) and mineral trioxide aggregate (MTA) were tested on Balb-c 3T3 mouse fibroblasts. The cells were seeded in 24-well culture plates at a density of 3.104 cells/well and incubated for 24 h. to allow attachment. Extracts from the substances were obtained according to ISO 10993-12 standards. After incubation at a 37oC temperature in air atmosphere of 5% of CO2, medium was aspirated and replaced with 1,0 mL of the extracts. The plates were incubated for 24 h. and the cytotoxicity was assessed in a spectrophotometer. The absorbance was read at 560 nm. There were two independent experiments in triplicates. Mean test absorptions were calculated and expressed as a percentage of the control cells together with standard deviations. The statistical approach was carried out with the ANOVA, Bartlett and Dunnet tests (p<0,05). Based on the TD50 results, the cytotoxicity can be ranked as: FC>FCD>SF>HC>MTA. Neutral Red test results showed that cells exposed to MTA, HC and SF did not affect the cells, when compared with control group, while FC and FCD reduced cell viability in approximately 65 %, when compared with control (p<0,05). The MTT assay demonstrated that the cytotoxicity of the materials can be ranked as: FC>FCD>SF>HC>MTA, with all the substances statistically significant different compared with control cells (p<0,01).
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-14122004-092122 |
| Date | 07 July 2004 |
| Creators | Menezes, José Vitor Nogara Borges de |
| Contributors | Bijella, Maria Francisca Thereza Borro |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | Tese de Doutorado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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