O benzeno é um solvente comprovadamente cancerígeno e, para substâncias com tal característica, não há limites de exposição considerados seguros. Em vista disso, as discussões internacionais e nacionais visam a diminuir, cada vez mais, os níveis de exposição ocupacional permitidos. O ácido trans, trans-mucônico (ttAM) , um produto de biotransformação do benzeno, tem sido preconizado como um bioindicador sensível da exposição ao solvente. Este trabalho foi desenvolvido com o propósito de validar método capaz de detectar o ttAM em urina de indivíduos expostos ao benzeno, bem com estabelecer o melhor período de coleta das amostras. A técnica escolhida foi a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com coluna de fase-reversa, Lichrosorb RP 18, e detector de ultra-violeta. O método mostrou-se linear entre 0,2 a 5,0 mg/L (r2 = 0,9943). Os limites de detecção e de quantificação obtidos foram, respectivamente, 0,1 e 0,2 mg/L. A porcentagem de recuperação absoluta média foi de 77,1% e de inexatidão de 27,9%. Os coeficientes de variação médios foram, para a precisão intra-ensaio 7,7 % e, para a interensaio 10,6%. O analito permaneceu estável na matriz por um período de 6 semanas para a concentração de 0,2 mg/L e de 15 semanas, para a 2,0 mg/L, se armazenada em freezer (-20°C) e por até dez dias sob refrigeração (4°C) para os adicionados de 0,2, 2,0 e 5,0 mg/L. Com estes resultados, a validação foi considerada satisfatória. O valor médio obtido nas amostras de trabalhadores ocupacionalmente expostos no final da jornada de trabalho foi de 0,81 mg/g creatinina (mediana=0,62 mg/g creatinina). Estes resultados foram superiores e estatisticamente diferentes (p=0,025) daqueles encontrados em amostras do início da jornada e do dia seguinte, mostrando ser o final da jornada o período que melhor reflete a exposição do dia de trabalho. / Benzene is a carcinogenic chemical used in many plants. The national and international discussions aim to low more and more the permitted occupational exposure limit to benzene, although in fact, there is no safe limit to carcinogens. The trans, trans-muconic acid (ttMA), a benzene metabolite, has been recommended as a sensitive bioindicator in the biological monitoring of workers exposed to this solvent. This work was developed in order to validate a method for ttMA analysis in samples of benzene-exposed workers as well as to establish the best sample collecting time. The chosen technique was the high pressure liquid chromatography with reverse-phase column, Lichrosorb RP 18, and UV detection. A linear relationship (r2 =0.9943) was observed in the range from 0.2 to 5.0 mg/L. The detection and quantification limits were respectively 0.1 and 0.2 mg/L. The average recovery was 77.1 % and the inaccuracy (bias) was 27.9 %. Precision, evaluated by variation coefficient, were 7.7 % (intraassay) and 10.6 % (inter-assay). The ttMA remained stable in the matrix during a period of six weeks for the 0.2 mg/L samples and fifteen weeks for the 2.0 mg/L samples, in both cases when stored at - 20°C. In 0.2, 2.0 and 5.0 spiked samples no significant differences were found when conserved at 4°C for ten days. In the occupationally exposed workers, ttMA values were significantly higher in post-shift samples (p = 0.025) than in pre-shift or in those collected in the following day. These results reveal that the end of the shift is the best period to take urine samples for benzene biomonitoring.

O benzeno é um solvente comprovadamente cancerígeno e, para substâncias com tal característica, não há limites de exposição considerados seguros. Em vista disso, as discussões internacionais e nacionais visam a diminuir, cada vez mais, os níveis de exposição ocupacional permitidos. O ácido trans, trans-mucônico (ttAM) , um produto de biotransformação do benzeno, tem sido preconizado como um bioindicador sensível da exposição ao solvente. Este trabalho foi desenvolvido com o propósito de validar método capaz de detectar o ttAM em urina de indivíduos expostos ao benzeno, bem com estabelecer o melhor período de coleta das amostras. A técnica escolhida foi a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com coluna de fase-reversa, Lichrosorb RP 18, e detector de ultra-violeta. O método mostrou-se linear entre 0,2 a 5,0 mg/L (r2 = 0,9943). Os limites de detecção e de quantificação obtidos foram, respectivamente, 0,1 e 0,2 mg/L. A porcentagem de recuperação absoluta média foi de 77,1% e de inexatidão de 27,9%. Os coeficientes de variação médios foram, para a precisão intra-ensaio 7,7 % e, para a interensaio 10,6%. O analito permaneceu estável na matriz por um período de 6 semanas para a concentração de 0,2 mg/L e de 15 semanas, para a 2,0 mg/L, se armazenada em freezer (-20°C) e por até dez dias sob refrigeração (4°C) para os adicionados de 0,2, 2,0 e 5,0 mg/L. Com estes resultados, a validação foi considerada satisfatória. O valor médio obtido nas amostras de trabalhadores ocupacionalmente expostos no final da jornada de trabalho foi de 0,81 mg/g creatinina (mediana=0,62 mg/g creatinina). Estes resultados foram superiores e estatisticamente diferentes (p=0,025) daqueles encontrados em amostras do início da jornada e do dia seguinte, mostrando ser o final da jornada o período que melhor reflete a exposição do dia de trabalho. / Benzene is a carcinogenic chemical used in many plants. The national and international discussions aim to low more and more the permitted occupational exposure limit to benzene, although in fact, there is no safe limit to carcinogens. The trans, trans-muconic acid (ttMA), a benzene metabolite, has been recommended as a sensitive bioindicator in the biological monitoring of workers exposed to this solvent. This work was developed in order to validate a method for ttMA analysis in samples of benzene-exposed workers as well as to establish the best sample collecting time. The chosen technique was the high pressure liquid chromatography with reverse-phase column, Lichrosorb RP 18, and UV detection. A linear relationship (r2 =0.9943) was observed in the range from 0.2 to 5.0 mg/L. The detection and quantification limits were respectively 0.1 and 0.2 mg/L. The average recovery was 77.1 % and the inaccuracy (bias) was 27.9 %. Precision, evaluated by variation coefficient, were 7.7 % (intraassay) and 10.6 % (inter-assay). The ttMA remained stable in the matrix during a period of six weeks for the 0.2 mg/L samples and fifteen weeks for the 2.0 mg/L samples, in both cases when stored at - 20°C. In 0.2, 2.0 and 5.0 spiked samples no significant differences were found when conserved at 4°C for ten days. In the occupationally exposed workers, ttMA values were significantly higher in post-shift samples (p = 0.025) than in pre-shift or in those collected in the following day. These results reveal that the end of the shift is the best period to take urine samples for benzene biomonitoring.

Os limites de exposição ocupacional ao benzeno, um agente carcinogênico, vêm diminuindo drasticamente nos últimos anos. Por outro lado, a concentração de benzeno em ambientes não ocupacionais tem aumentado devido à emissão biogênica e antropogênica, como exaustão de motores a gasolina e fumaça de cigarro. Indicadores Biológicos de Exposição (IBE) são utilizados como ferramentas importantes na avaliação da exposição humana ao benzeno. Com a diminuição dos limites de exposição, se faz necessário o desenvolvimento de metodologias analíticas com sensibilidade adequada para a determinação de IBE em fluidos biológicos que se correlacionem com baixas concentrações de benzeno absorvido pelo organismo. A utilização do fenol urinário como IBE ao benzeno, embora reconhecida mundialmente, tem a desvantagem de não apresentar boa correlação com a concentração de benzeno ambiental quando esta é menor do que 10 ppm (32 mg/m3). Os ácidos trans,trans-mucônico e S-fenilmercaptúrico, metabólitos do benzeno encontrados na urina, estão entre os compostos mais estudados como IBE ao benzeno. Neste trabalho, o ácido trans,trans-mucônico foi determinado na urina de indivíduos expostos ao benzeno utilizando as técnicas de Eletroforese Capilar (CE) e HPLC, ambas com detecção no UV. Na determinação por HPLC foi adaptada uma metodologia da literatura utilizando coluna analítica com fase reversa. Na determinação por CE foi proposta uma metodologia empregando duas condições analíticas alternativas: uma que utiliza um capilar especial com cela ótica de alta sensibilidade e a outra que utiliza um capilar comum, mas com adição de um modificador orgânico ao eletrólito. As duas condições apresentaram grandes vantagens, como análise rápida (15 minutos) e baixo limite de detecção (25 µg/L). Foram analisadas amostras de urina de indivíduos fumantes e não fumantes onde a sensibilidade da metodologia proposta foi suficiente para diferenciar estatisticamente os dois grupos avaliados. / The occupational exposure limits for benzene, a well-known carcinogenic agent, showed a drastic and continuous decrease in the last few years. In the other hand, benzene concentrations in non-occupational environments are increasing due to biogenic and anthropogenic emissions, like motor fuelled exhaustion and cigarette smoke. Biological markers of exposure are used like a powerful aid to evaluate human exposure for benzene. With the decrease of the exposure limits, the development of analytical methodologies is needed to accomplish adequate sensitivity for the exposure markers determination founded in biological fluids, in order to establish a correlation between the marker and the benzene concentration absorbed by organism. One of the biological marker of exposure for benzene recognized worldwide is urinary phenol, but the exposure for benzene at concentrations smaller than 10 ppm (32 mg/m3) usually is not correlated with urinary phenol concentration. The benzene metabolites trans,trans-Muconic and S-phenylmercapturic acids found in urine have been largely evaluated as biological markers of exposure. At the present work, trans,trans-muconic acid in urine from exposed individuals was determined by Capillary Electrophoresis (CE) and HPLC using UV detection. For HPLC, a pre-established method from literature using reversed phase column was utilized. A new analytical method was proposed using CE in two different conditions: one utilized a special capillary with high sensitivity optical cell and the other utilized a common capillary and an organic modifier added to the electrolyte. Both conditions showed interesting advantages, such as short-time analysis (15 min) and lower limit of detection (L.O.D = 25 µg/L). Urine samples from smokers and non-smokers individuals were analyzed and the proposed method allowed statistical differentiation between these groups.

Os limites de exposição ocupacional ao benzeno, um agente carcinogênico, vêm diminuindo drasticamente nos últimos anos. Por outro lado, a concentração de benzeno em ambientes não ocupacionais tem aumentado devido à emissão biogênica e antropogênica, como exaustão de motores a gasolina e fumaça de cigarro. Indicadores Biológicos de Exposição (IBE) são utilizados como ferramentas importantes na avaliação da exposição humana ao benzeno. Com a diminuição dos limites de exposição, se faz necessário o desenvolvimento de metodologias analíticas com sensibilidade adequada para a determinação de IBE em fluidos biológicos que se correlacionem com baixas concentrações de benzeno absorvido pelo organismo. A utilização do fenol urinário como IBE ao benzeno, embora reconhecida mundialmente, tem a desvantagem de não apresentar boa correlação com a concentração de benzeno ambiental quando esta é menor do que 10 ppm (32 mg/m3). Os ácidos trans,trans-mucônico e S-fenilmercaptúrico, metabólitos do benzeno encontrados na urina, estão entre os compostos mais estudados como IBE ao benzeno. Neste trabalho, o ácido trans,trans-mucônico foi determinado na urina de indivíduos expostos ao benzeno utilizando as técnicas de Eletroforese Capilar (CE) e HPLC, ambas com detecção no UV. Na determinação por HPLC foi adaptada uma metodologia da literatura utilizando coluna analítica com fase reversa. Na determinação por CE foi proposta uma metodologia empregando duas condições analíticas alternativas: uma que utiliza um capilar especial com cela ótica de alta sensibilidade e a outra que utiliza um capilar comum, mas com adição de um modificador orgânico ao eletrólito. As duas condições apresentaram grandes vantagens, como análise rápida (15 minutos) e baixo limite de detecção (25 µg/L). Foram analisadas amostras de urina de indivíduos fumantes e não fumantes onde a sensibilidade da metodologia proposta foi suficiente para diferenciar estatisticamente os dois grupos avaliados. / The occupational exposure limits for benzene, a well-known carcinogenic agent, showed a drastic and continuous decrease in the last few years. In the other hand, benzene concentrations in non-occupational environments are increasing due to biogenic and anthropogenic emissions, like motor fuelled exhaustion and cigarette smoke. Biological markers of exposure are used like a powerful aid to evaluate human exposure for benzene. With the decrease of the exposure limits, the development of analytical methodologies is needed to accomplish adequate sensitivity for the exposure markers determination founded in biological fluids, in order to establish a correlation between the marker and the benzene concentration absorbed by organism. One of the biological marker of exposure for benzene recognized worldwide is urinary phenol, but the exposure for benzene at concentrations smaller than 10 ppm (32 mg/m3) usually is not correlated with urinary phenol concentration. The benzene metabolites trans,trans-Muconic and S-phenylmercapturic acids found in urine have been largely evaluated as biological markers of exposure. At the present work, trans,trans-muconic acid in urine from exposed individuals was determined by Capillary Electrophoresis (CE) and HPLC using UV detection. For HPLC, a pre-established method from literature using reversed phase column was utilized. A new analytical method was proposed using CE in two different conditions: one utilized a special capillary with high sensitivity optical cell and the other utilized a common capillary and an organic modifier added to the electrolyte. Both conditions showed interesting advantages, such as short-time analysis (15 min) and lower limit of detection (L.O.D = 25 µg/L). Urine samples from smokers and non-smokers individuals were analyzed and the proposed method allowed statistical differentiation between these groups.