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FORMULAÇÕES NANOESTRUTURADAS CONTENDO RUTINA: DESENVOLVIMENTO, ATIVIDADE ANTIOXIDANTE IN VITRO E EFEITO SOBRE A CICATRIZAÇÃO CUTÂNEA / NANOSTRUCTURED FORMULATIONS CONTAINING RUTIN: DEVELOPMENT, IN VITRO ANTIOXIDANT ACTIVITY AND EFFECT ON THE CUTANEOUS WOUND HEALING

Almeida, Juliana Severo de 16 August 2010 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work had as main objective the development of nanostructured formulations containing rutin, using nanoparticles prepared with alternative vegetables oils. In the first chapter it was demonstrated the feasibility of preparing nanocapsules and nanoemulsions using grape seed or almond kernel oil. Nanocapsule suspensions and nanoemulsions were prepared by the interfacial deposition of preformed polymer and spontaneous emulsification, respectively. All formulations presented nanometric mean size, polydispersity index below 0.30, negative zeta potential, pH values between 6.5 and 7.5 remaining stable after 6 storage months. These formulations promoted the protection of the active against UV degradation, regardless of the type of the oily phase or vesicle. In the second chapter, formulations prepared with grape seed oil were selected for the development of rutin-loaded nanoparticles, as well as to evaluate its in vitro antioxidant activity and photostability. All formulations presented nanometric size, low polydispersity index, acid pH values, negative zeta potential and encapsulation efficiency close to 100 %. Nanoparticles were able to protect rutin against UV photodegradation, if compared to rutin ethanolic solution. In the study of the in vitro antioxidant activity, rutin-loaded nanocapsules and nanoemulsions showed a lower rutin decay rate compared to the rutin ethanolic solution when exposed to UV radiation in the presence of OH radical. However, its presence in nanocapsules led to a prolonged in vitro antioxidant activity compared to the rutin-loaded nanoemulsions. Finally, in the third chapter we studied the development of hydrogels containing rutin (free or associated to polymeric nanocapsules). Their activity on the cutaneous wound healing in rats was evaluated. The developed formulations showed adequate properties regarding their cutaneous administration. In vivo response concerning the healing effect of hydrogels was evaluated by the regression of skin lesions after six days of treatment. Markers of oxidative stress in the lesions of rats were also evaluated, as levels of lipid peroxidation analyzed by the method of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), determination of protein carbonyls levels, total proteins levels, glutathione (GSH) levels, vitamin C and evaluation of the antioxidant enzyme catalase (CAT). This last chapter showed for the first time the feasibility of the dermatological use of such formulations containing rutin to promote the in vivo wound healing. / Este trabalho teve como principal objetivo o desenvolvimento de formulações nanoestruturadas contendo rutina, a partir de nanopartículas contendo óleos vegetais até então não estudados no preparo destas formulações. No primeiro capítulo foi demonstrada a viabilidade de preparar nanocápsulas e nanoemulsões contendo o óleo de semente de uva e de amêndoas doce como fase oleosa. As suspensões de nanocápsulas e nanoemulsões foram preparadas pelo método da deposição interfacial do polímero pré-formado e emulsificação espontânea, respectivamente. Todas as formulações apresentaram tamanho médio nanométrico, índice de polidispersão inferior a 0,30, potencial zeta negativo e valores de pH entre 6,5 e 7,5, permanecendo estáveis após 6 meses de armazenamento. As formulações promoveram a fotoproteção do ativo frente à degradação UV, independente do tipo de fase oleosa e do tipo de vesícula. No segundo capítulo, as formulações contendo o óleo de semente de uva foram selecionadas para o estudo do desenvolvimento de nanopartículas contendo rutina, bem como avaliação de sua atividade antioxidante in vitro e fotoestabilidade. Após o preparo, todas as formulações apresentaram tamanho nanométrico de partículas, baixo índice de polidispersão, valores de pH ácido, potencial zeta negativo e eficiência de encapsulação próxima à 100%. As nanopartículas protegeram a rutina frente à fotodegradação UV, quando comparadas à solução etanólica. No estudo da atividade antioxidante in vitro, as nanocápsulas e nanoemulsões apresentaram uma menor taxa de decaimento da rutina comparada com a solução etanólica, quando expostas à radiação UV em presença do radical ·OH. No entanto, a presença das nanocápsulas levou a uma atividade antioxidante in vitro mais prolongada comparada com as nanoemulsões contendo rutina. Finalmente, no terceiro capítulo estudamos o desenvolvimento de hidrogéis contendo rutina livre ou associada a nanocápsulas poliméricas, avaliando a sua atividade sobre a cicatrização de lesões cutâneas em ratos. As formulações desenvolvidas apresentaram propriedades adequadas para aplicação tópica. A resposta in vivo do efeito cicatrizante foi avaliada através da regressão de lesões na pele após 6 dias de tratamento. Marcadores do estresse oxidativo nas lesões dos ratos foram também avaliados, como os níveis da peroxidação lipídica através do método de TBARS, níveis de proteína carbonilada, níveis de proteínas totais, níveis de glutationa (GSH), vitamina C e avaliação da enzima antioxidante catalase (CAT). Este terceiro capítulo demonstrou pela primeira vez a potencialidade do emprego dermatológico de hidrogéis contendo rutina para a promoção de cicatrização de feridas in vivo.

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