目錄…………………………………………………………………………I 圖目錄……………………………………………………………………IV 表目錄……………………………………………………………………VI 縮寫表……………………………………………………………………VII 謝誌………………………………………………………………………IX 中文摘要…………………………………………………………………XI 英文摘要…………………………………………………………………XIII 第壹章、前言………………………………………………………………1 第貳章、文獻探討…………………………………………………………3 第2-1節 紫外線…………………………………………………….…..4 2-1-1. 紫外線……………………………………………………….4 2-1-2. 紫外線的分類……………………………………………….5 2-1-3. 紫外線對人體健康的益處………………………………….6 2-1-4. 紫外線對人體的傷害……………………………………….7 第2-2節 自由基…………………………………………………………8 2-2-1. 自由基的介紹……………………………………………….8 2-2-2. 自由基的來源……………………………………………….8 2-2-3. 紫外線與自由基…………………………………………….9 2-2-4. 自由基種類………………………………………………….9 第2-3節 抗氧化酵素訊息的傳遞路徑………………………………..12 2-3-1. Nf2…………………………………………………………..12 2-3-2. Keap1………………………………………………………..12 2-3-3. ARE………………………………………………………….13 2-3-4. Nrf2的活化機制…………………………………………….14 第2-4節 細胞抗氧化的防禦系統……………………………………17 2-4-1. 酵素型抗氧化防禦系統…………………………………..18 2-4-2. 非酵素型抗氧化防禦系統………………………………...24 第參章、研究動機與實驗設計架構圖……………………………………...25 第3-1節 硏究動機……………………………………………………..26 第3-2節 實驗設計架構………………………………………………..27 第肆章、實驗材料與方法……………………… …………………………28 第4-1節 實驗材料……………………………………………………...29 第4-2節 實驗儀器……………………………………………………...32 第4-3節 實驗方法……………………………………………………...33 4-3-1. 細胞培養…………………………………………………...33 4-3-2. 存活率試驗………………………………………………...36 4-3-3. ROS產量測定………………………………………………38 4-3-4. 細胞毒性的測定…………………………………………...40 4-3-5. Comet assay彗星試驗………………………………………41 4-3-6. 細胞GSH含量測定………………………………………..44 4-3-7. 細胞凋亡試驗……………………………………………...46 4-3-8. 細胞總蛋白質萃取………………………………………...48 4-3-9. 細胞核與細胞質之蛋白質萃取…………………………...49 4-3-10. 蛋白質定量……………………………………………….51 4-3-11. 西方墨點分析…………………………………………….52 4-3-12. 免疫螢光染色…………………………………………….56 4-3-13. 轉染作用………………………………………………….58 4-3-14. 冷光酵素報導基因分析………………………………….60 4-3-15. RNA干擾…………………………………………………62 4-3-16. 統計分析………………………………………………….64 第伍章、實驗結果與圖表…………………………………………………65 第5-1節 ERG對HaCaT細胞的抗光氧化能力………………………66 5-1-1. ERG以及UVA對HaCaT細胞的細胞毒性影響…………66 5-1-2. ERG對UVA誘導活性氧物種含量之影響………………..66 5-1-3. ERG對UVA誘導的細胞膜損傷之影響…………………..67 5-1-4. ERG對UVA誘導的DNA損傷之影響……………………67 5-1-5. ERG對UVA所誘導之氧化傷害的影響…………………..68 5-1-6. ERG對UVA引發之細胞凋亡的影響……………………..68 第5-2節 ERG誘導之抗氧化系統的機制探討………………………..79 5-2-1. ERG對抗氧化酵素的影響…………………………………79 5-2-2. ERG活化Nrf2路徑探討……………………………………80 5-2-3. ERG影響Nrf2入核的表現………………………………..80 5-2-4. ERG對抗氧化酵素轉錄的影響……………………………81 5-2-5. 以siNrf2探討ERG的保護機制和Nrf2之間的關係……81 第陸章、討論………………………………………………………………95 第6-1節 ERG對於UVA刺激HaCaT細胞造成的細胞損傷之影響..97 第6-2節 ERG對抗氧化基因的表現之影響………………………….97 第6-3節 ERG與UVA影響Nrf2-Keap1 pathway……………………98 第6-4節 Nrf2對ERG所抑制UVA造成之光氧化傷害的影響……..98 第柒章、結論……………… …………………………………………..100 參考文獻 ………………….……………………………………………..102