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Identification de biomarqueurs circulants assistée par un dispositif microfluidique pour la stratification du risque dans la leucémie aigüe lymphoblastiquePoncelet, Lucas 10 1900 (has links)
La leucémie aigüe lymphoblastique de type B (B-LAL) est la principale cause de mortalité par maladie chez les enfants. Bien que la chimiothérapie moderne puisse guérir la majorité des patients, environ 20 % d'entre eux présentent une réponse inadéquate ou vont rechuter. La stratification des patients en sous-types moléculaires distincts grâce à la cytogénétique, à la biologie moléculaire et au profilage transcriptomique est essentielle pour adapter les thérapies en fonction des risques. Le temps nécessaire à l'analyse traditionnelle des échantillons de tumeurs empêche une intervention rapide au début du traitement. Comme alternative aux biopsies tissulaires conventionnelles, nous proposons que les vésicules extracellulaires (VE), particulièrement les exosomes présents dans le sang périphérique, sont des transporteurs potentiels de biomarqueurs tels que l’ARN. Grâce à l'analyse d'une cohorte de patients représentant deux sous-types moléculaires distincts de la B-LAL, des transcrits d'ARN encapsulés dans les exosomes ont été identifiés comme biomarqueurs non invasifs prometteurs. Ces résultats plaident en faveur d'une détection précoce et d'un suivi continu de la B-LAL de l’enfant à l'aide de biopsies liquides basées sur les exosomes. Néanmoins, le processus de purification des exosomes, long et complexe, nécessite une normalisation et une amélioration afin d'établir une crédibilité dans le suivi clinique de la maladie.
Nous avons développé une nouvelle approche de capture magnétique sur une puce microfluidique, basée sur l’assemblage de nanoparticules magnétiques (MNP) en suspension pour une séparation magnétique efficace dans les biofluides. Cette technologie innovante a servi d'élément crucial au sein d'un processeur fluidique, automatisant la séparation des VE du sang total basée sur la taille et l'affinité. Au-delà de la simplification du processus, elle améliore considérablement la reproductibilité et la répétabilité de la purification des exosomes.
Cette thèse présente une approche multidisciplinaire pour améliorer le pronostic du cancer. Les résultats offrent un premier aperçu du profil transcriptomique des exosomes dans le sang des patients atteints de B-ALL, révélant des biomarqueurs potentiels spécifiques au sous-type. Le dispositif microfluidique répond à un besoin pressant en permettant une purification efficace des VE à partir du sang total, prometteur pour l'application clinique. / B-cell acute lymphoblastic leukemia (B-ALL) stands as the foremost cause of mortality due to disease in children. While modern chemotherapy can cure a majority of patients, around 20% exhibit inadequate response or are susceptible to relapse. Stratifying patients into distinct molecular subtypes through cytogenetics, molecular biology, and transcriptomic profiling is essential for tailoring risk-oriented therapies. However, the time required for traditional tumor sample analysis hampers swift intervention at the onset of treatment. As an alternative to conventional tissue biopsies, we proposed that extracellular vesicles (EVs), notably exosomes present in peripheral blood, are potential carriers of RNA-based biomarkers of B-ALL. Through analysis of a patient cohort representing two distinct molecular B-ALL subtypes, exosome-encapsulated RNA transcripts emerged as promising non-invasive biomarkers. These findings advocate for the early detection and ongoing monitoring of childhood B-ALL using exosome-based liquid biopsies. Nonetheless, the lengthy and intricate exosome purification process necessitates standardization and enhancement to establish credibility in clinical disease monitoring.
We then developed a novel magnetic capture approach on a microfluidic chip, employing suspended magnetic nanoparticle (MNP) assemblies for efficient in-flow magnetic separation in biofluids. This innovative technology served as a crucial element within a fluidic processor, automating the purification of exosomes from whole blood through size- and affinity-based separation. Beyond simplifying the process, it significantly heightens the reproducibility and consistency of exosomes purification.
This thesis presents a multifaceted approach to enhance cancer prognosis. The results offer a first insight into the transcriptomic landscape of exosomes in the blood of B-ALL patients, revealing potential subtype-specific biomarkers. The microfluidic device addresses a pressing need by enabling efficient exosome purification from whole blood, holding promise for clinical translation.
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