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Expressão de aquaporinas no sistema digestório e túbulos de Malpighi de Apis mellifera (Hymenoptera: Apidae) e caracterização funcional de Am_Eglp 1 / Aquaporin expression in the digestive tract and Malpighian tubules of Apis mellifera (Hymenoptera: Apidae) and functional characterization of Am_Eglp 1Souza, Débora Linhares Lino de 31 July 2018 (has links)
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Previous issue date: 2018-07-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Aquaporinas são proteínas de membrana responsáveis pelo transporte de água através das membranas celulares. Estas proteínas são encontradas e amplamente investigadas em insetos, porém pouco estudadas em Apis mellifera. As regiões do sistema digestório e os túbulos de Malpighi dos insetos expressam aquaporinas, o que aumenta a permeabilidade natural dos tecidos e a velocidade do transporte de água. Neste estudo foi avaliado o nível de expressão de cinco genes preditos para aquaporinas, que apresentaram diferentes níveis de expressão nos órgãos do sistema digestório – papo, intestino médio, íleo e reto – e túbulos de Malpighi de abelhas forrageiras. O gene Am_Eglp 1 apresentou maior expressão relativa no intestino médio, e a hibridização in situ confirmou a presença de RNA mensageiro para este gene em todas as regiões investigadas. Além disso, o ensaio de absorção de água, após a expressão heteróloga de Am_Eglp 1 em ovócitos de Xenopus laevis, comprovou que o gene da aquaporina codifica para uma proteína funcional, capaz de transportar água e que é bloqueada por mercúrio. Este foi o primeiro relato da funcionalidade de uma aquaporina de abelhas, que atua principalmente no intestino médio, aumentando a permeabilidade à água nas membranas da região. / Aquaporins are membrane proteins responsible for water transport through cell membranes. These proteins are found and widely investigated in insects, but still little studied in Apis mellifera. In insects, digestive tract and Malpighian tubules express aquaporin, increasing the natural permeability of tissues and the speed of water transport. In this study five predicted aquaporin genes had their expression level evaluated in forager honey bees, which presented different expression on digestive tract organs – crop, midgut, ileum and rectum – and Malpighian tubules. Am_Eglp 1 showed higher relative expression level in the midgut, and in situ hybridization confirmed the presence of mRNA to this gene in every organ evaluated. In addition, heterologous expression of Am_Eglp 1 was performed in Xenopus laevis oocytes, followed by water uptake assay, demonstrating that this gene encodes for a functional aquaporin, capable of transporting water and blocked by mercury. This was the first time a honey bee aquaporin was tested, and the results suggest that Am_Eglp 1 plays an important role on increasing membrane water permeability, mainly on A. mellifera midgut.
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