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Estudo da partição de imunoglobulina G em sistemas aquosos bifásicos utilizando PEG/tampão citrato / Partition study of immunoglobulin G in aqueous two-phase systems using PEG/citrate buffer

Torres, Ana Alice de Fátima Nunes 28 February 2013 (has links)
TORRES, A. A. F. N. Estudo da partição de imunoglobulina G em sistemas aquosos bifásicos utilizando PEG/tampão citrato. 2013. 55 f. Dissertação (Mestrado em Engenharia Química) - Centro de Tecnologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br) on 2015-02-13T18:03:21Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_aafntorres.pdf: 1188113 bytes, checksum: 1f09065386ad7da26aaf21b6fc9e019e (MD5) / Approved for entry into archive by Marlene Sousa(mmarlene@ufc.br) on 2015-02-13T18:04:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_aafntorres.pdf: 1188113 bytes, checksum: 1f09065386ad7da26aaf21b6fc9e019e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-13T18:04:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_aafntorres.pdf: 1188113 bytes, checksum: 1f09065386ad7da26aaf21b6fc9e019e (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / In this work, it was studied the extraction of immunoglobulin G (IgG) in Aqueous Two Phase Systems (ATPS) composed of polyethylene glycols (PEG) with molecular weight equal to 4000, 6000 and 8000 g.mol-1 and citrate buffer with pH 5.0, 6.0 and 7.0. First, the behavior for each system in equilibrium was determined by two different methodologies: cloud-point from which binodal curves were obtained and density, which led to the tie-lines. The results obtained by both techniques showed good agreement. It was observed that the increase in PEG molecular weight and the increase in citrate buffer pH led to an increase in the area of the binodal curve. However, for the latter case, the expansion of two-phase region was not significant when the pH increased from 6.0 to 7.0. Regarding the tie-lines, there were also no significant changes in both length and slopes of the same while varying the molecular weight and pH, which shows the high ability of citrate ions on hydrating theirselves preferably and promoting fully or almost fully the PEG exclusion bottom phase, as observed in this study. The study of partition was made from a statistical design of type 24 with complete resolution and adding three central points, having as variables % PEG, % citrate buffer, pH and PEG molar mass. For this purpose the software Statistica 7 was used. 19 experiments were performed and each independent variable was tested in three levels, being the values of PEG percentage equals to 26, 28 and 30% (m/m) and citrate buffer percentage equals to 8, 10 and 12% (w/w). The experiments showed that the highest values of the partition coefficient (Kp) were obtained in systems with pH 7.0 and 12% citrate buffer, classified as statistically significant factors. These values of pH and % citrate buffer were settled and other 27 experiments were conducted with different concentrations of NaCl (0, 0.2 and 0.4 M). There was an increase in the Kp value when the NaCl concentration increased. The results of this study showed that high Kp values can be obtained even at low concentrations of neutral salt. This result is satisfactory since the use of high concentrations of salts in an industrial process may cause various problems such as the reduction in service life due to corrosion of the equipment thereof. / Neste trabalho, estudou-se a extração de Imunoglobulina G (IgG) em Sistemas Aquosos Bifásicos (SABs) compostos por polietilenoglicóis (PEG) com massas moleculares iguais a 4000, 6000 e 8000 g.mol-1 e tampão citrato com pHs 5,0, 6,0 e 7,0. Primeiramente, determinou-se o comportamento no equilíbrio para cada sistema por duas metodologias diferentes: cloud-point, a partir do qual foram obtidas as curvas binodais, e densitometria, que deu origem às linhas de amarração. Os resultados obtidos por ambas as técnicas apresentaram uma boa concordância. Observou-se que o aumento da massa molar do PEG, bem como o aumento do pH do tampão citrato levou a um aumento da área sobre a curva binodal. Entretanto, para o último caso, a expansão da região bifásica não foi significante quando se aumentou o pH de 6,0 para 7,0. Em relação às linhas de amarração, também não foram observadas mudanças significativas tanto no comprimento como nas inclinações das mesmas quando se variou a massa molar e o pH, o que mostra a alta capacidade dos íons citrato em se hidratar preferencialmente e promover quase totalmente ou totalmente a exclusão do PEG da fase fundo, como observado nesse trabalho. O estudo de partição se deu a partir de um planejamento estatístico do tipo 24 com resolução completa e adição de três pontos centrais, tendo como variáveis a % PEG, % tampão citrato, pH e massa molar do PEG. Para tal finalidade o software Statistica 7 foi utilizado. Foram realizados 19 experimentos e cada variável independente foi testada em três níveis, sendo os valores de porcentagem de PEG iguais a 26, 28 e 30% m/m e de tampão citrato iguais 8, 10 e 12% m/m. Os experimentos que apresentaram os maiores valores de coeficiente de partição (Kp) foram aqueles com pH 7,0 e 12% de tampão citrato, classificados como fatores significativos estatisticamente. Fixaram-se, então, esses valores de pH e % de tampão citrato e realizaram-se mais 27 experimentos com diferentes concentrações de NaCl (0, 0,2 e 0,4 M). Observou-se um aumento no valor de Kp quando se aumentou a concentração de NaCl. Os resultados apresentados neste estudo mostraram que elevados valores de Kp podem ser obtidos mesmo a baixas concentrações de sal neutro. Este resultado mostrou ser satisfatório visto que a utilização de grandes concentrações de sais em um processo industrial pode ocasionar diversos problemas como, por exemplo, a redução na vida útil dos equipamentos devido à corrosão dos mesmos.

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