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MicroRNA regulation of axial patterning during Arabidopsis embryogenesis

Lagiotis, Georgios January 2014 (has links)
Pattern formation is the process by which undifferentiated cells divide and differentiate to generate complex tissues and organs. In plants, pattern formation begins in embryogenesis and continues post-embryonically with the function of the meristems. microRNAs (miRNAs), which are small regulatory RNAs that repress gene expression, are involved in a variety of patterning processes in plants, including the formation and function of the meristems and establishment of polarity. For example, regulation of the class III HOMEODOMAIN-LEUCINE ZIPPER (HD-ZIP III) transcription factors by miR165/6 is not only involved in the formation and function of the meristems, but also in polarity establishment in the leaf, and in axial patterning during embryogenesis. To gain a better understanding of the role of miRNAs in embryonic patterning, I investigated the tissue-specific functions of the miRNA biogenesis protein SERRATE (SE), which is required for the regulation of the HD-ZIP IIIs via miR165/6. By expressing SE in various domains in se-5 null mutant embryos, I revealed that although SE is expressed throughout the embryonic body, tissue-specific expression of SE from either the upper or lower tier of the embryo is sufficient for correct patterning. This observation suggests a SE-dependent non-cell autonomous and bi-directional mechanism that influences patterning in Arabidopsis embryos. Furthermore, through a suppressor screen of a se-3 loss-of-function mutant allele, I identified mutants in genes that likely function upstream of SE, and downstream or in parallel of the HD-ZIP IIIs. One of those se-3 suppressors is likely to be a mutant in the BELL homeobox gene POUND-FOOLISH (PNF).
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Spatiotemporal roles of retinoic acid signaling in the cephalochordate amphioxus / Régulation spatio-temporelle de la voie de signalisation de l'Acide Rétinoïque chez le Céphalochordé amphioxus

Chen, Jie 17 May 2011 (has links)
L'acide rétinoïque (AR) est un morphogène dérivé de la vitamine A, qui intervient dans le contrôle de l'organogenèse, de la prolifération et de la différenciation cellulaires chez les Chordés. Dans ce contexte, nous avons étudié les régulations spatio-temporelles de la voie de signalisation de l’AR au cours du développement de l’amphioxus, en mettant l'accent sur l’espèce européenne Branchiostoma lanceolatum.Nous avons tout d'abord inhibé ou activé la voie de signalisation de l’AR lors du développement embryonnaire en traitant des embryons d’amphioxus à des doses variables de composés pharmacologiques interférant avec le métabolisme des rétinoïdes. Grâce à l’utilisation d’outils mathématiques spécifiques, nous avons établi un schéma détaillé des effets des traitements effectués sur le développement du système nerveux central (SNC) et du pharynx chez l’amphioxus en nous basant sur l’expression de gènes marqueurs de tissus spécifiques. À l’issue de cette première analyse, nous avons par la suite étudié les effets d’une perturbation de la signalisation de l’AR à des points clés du développement chez l’amphioxus lors de la régionalisation du SNC et du pharynx. Nous avons ainsi montré que la voie de signalisation de l’AR intervient dans la régionalisation de l’axe antéro-postérieur via le contrôle des gènes hox dès le stade gastrula et jusqu’aux stades larvaires. En outre, nous avons réalisé l'étude préliminaire du gène homologue chez l’amphioxus du gène aldh1a2 des Vertébrés, et avons démontré que la régulation du niveau de synthèse de l’AR au cour du développement est conservée entre l’amphioxus et les Vertébrés. Finalement, nous avons montré que la voie de l’AR participe également à la morphogenèse caudale chez l’amphioxus, et que le mécanisme impliqué semble différent de celui proposé chez les Vertébrés où l’AR contrôle la structuration de la nageoire caudale par le ciblage des tissus mésenchymateux. / Retinoic acid (RA) is an endogenous vitamin A-derived morphogen. In this context, we studied the spatiotemporal roles of RA signaling in amphioxus development, focusing on the European amphioxus species: Branchiostoma lanceolatum. We first created excess and insufficiency models of RA signaling by exposing amphioxus embryos to series of doses of different pharmacological compounds targeting either the RA receptors or the RA metabolism machinery. By introducing the important mathematical concept of a Cartesian coordinate system founded by René Descartes, we created detailed diagrams of the concentration-dependent defects caused by RA signaling in the central nervous system (CNS) and pharynx of amphioxus by evaluating the statistical significances of tissue-specific marker gene expression in labeled embryos. This analysis yielded a very detailed description of the sensitivities of the developing amphioxus CNS and pharynx to altered RA signaling levels. Following this initial challenge, we correlated the effects of altered RA signaling levels with key amphioxus developmental stages characterized by structural transitions in CNS and pharynx. We show that hox-mediated RA signaling in axial patterning is active beyond the gastrula stage and might be maintained until at least early larval stage, with possible roles in more regionalized axis formation and organ induction. In addition, we carried out a preliminary study on a RA synthesizing gene in amphioxus, called aldh1a, a possible homolog of the vertebrate aldh1a2 gene, demonstrating that the feedback between RA signaling and RA synthesizing levels has emerged before the split of the cephalochordate and vertebrate lineages. Moreover, we are able to show that RA signaling also participates in tail fin morphogenesis in amphioxus by a mechanism that is probably not comparable to that in vertebrates, where RA modulates caudal fin patterning through targeting mesenchymal derivatives.

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