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Estudos da estabilidade, flexibilidade e atividade enzimática da B-mananase da bactéria hipertermofílica Thermotoga petrophilaSilva, Viviam Moura da January 2014 (has links)
Orientador: Prof. Dr. Wanius José Garcia da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2014. / A proteina endo-B-1,4-mananase da bacteria Thermotoga petrophila (TpMan) e uma enzima hipertermoestavel que catalisa a hidrolise de ligacoes B-1,4-manosidicas em varios polissacarideos contendo manana. Um recente estudo mostrou que a enzima TpMan e composta de um dominio catalitico GH5 e um dominio de ligacao ao carboidrato CBM27 conectados atraves de um linker, entretanto, ate o momento, a estrutura tridimensional cristalografica nao foi determinada para a enzima completa. Pouco se sabe sobre a conformacao da enzima TpMan intacta como tambem o papel do comprimento e flexibilidade do linker sobre o arranjo espacial dos dominio constitutivos. Neste estudo, nos reportamos a primeira caracterizacao estrutural da enzima TpMan completa utilizando a tecnica de espalhamento de raios-X a baixos angulos (SAXS) combinada com a estrutura tridimensional dos dominios individuais para elucidar o modelo de baixa resolucao, as dimensoes globais, e a flexibilidade desta enzima modular em diferentes temperaturas. Nossos resultados sao consistentes com um linker que apresenta uma estrutura compacta e que ocupa um pequeno volume quando comparado com seu grande numero de residuos de aminoacidos (102 residuos de aminoacidos). Alem disso, a 20 oC os resultados sao consistentes com um modelo onde a enzima TpMan e um monomero composto de tres dominios e que apresenta nivel de flexibilidade molecular em solucao. Mesmo a enzima intacta apresentando algum grau de flexibilidade, existe uma conformacao preferivel, a qual pode ser descrita pelo procedimento de modelagem de corpo rigido. Finalmente, os resultados indicam que a enzima TpMan sofre uma transicao dependente da temperatura entre estados conformacionais de sua estrutura secundaria regular. Nossos resultados sugerem que o linker pode otimizar a geometria entre os outros dois dominios com respeito ao substrato a altas temperaturas. Os estudos apresentados aqui devem proporcionar uma base util para futuros estudos biofisicos da enzima TpMan intacta.
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