Orientador: Edivaldo Domingues Velini / Resumo: Esta pesquisa foi realizada em Campinas SP/Brasil e teve como o objetivo estudar a persistência do herbicida sulfentrazone em solos cultivados com cana-deaçúcar e soja, e nesta, os efeitos da toxicidade do resíduo do herbicida nas culturas sucedâneas de milheto, girassol, aveia, trigo e feijão. Os solos dos ensaios com a soja e a cana-de-açúcar tiveram as seguintes características, respectivamente, 46% e 23% da argila; 12% e 13% do silte; 42% e 64% da areia 4% e 1% de MO e com pHs de 5,.8 e 6,4. As experiências foram projetadas em blocos ao acaso com 5 repetições. As amostras do solo foram coletadas na profundidade de 0-10cm, de 0-704 DAT (23 amostras) e de 0-539 DAT (24 amostras) nos experimentos de cana-de-açúcar e soja, respectivamente. A persistência do sulfentrazone foi avaliada por bioensaios usando a beterraba como a planta do teste. No ensaio com a cana-deaçúcar, os efeitos do sulfentrazone na beterraba foram detectados até 601 e 704 DAT para 0,6 e 1,2 kg a.i./ha, respectivamente. No ensaio com a soja, foram observados, os efeitos das mesmas doses até 376 e 539 DAT. Pelas análises das diversas características de desenvolvimento nas nas culturas que sucederam a soja, foi demonstrado que o resíduo do sulfentrazone afetou crescimento e o rendimento das culturas de milheto e aveia; por outro lado, o girassol e o feijão não foram afetados; o trigo foi afetado, somente, pela dose mais elevada. / Abstract: This research was carried out in Campinas - SP / Brazil and had as objective to study the residual effects and persistence of sulfentrazone in sugarcane and soybean ecosystems and the toxicity of the residues of this herbicide to millet, sunflower, oats, wheat and beans cultivated in succession to soybean. The soils of the soybean and sugarcane fields had, respectively, 46% and 23% of clay; 12% and 13% of silt; 42% and 64% of sand 4% and y% of OM and pHs of 5,8 and 1,1.The experiments were designed in randomized blocks with 5 replications. Soil samples were collected at the depth of 0-10cm, from 0-704 DAT (23 timings) and from 0-539 DAT (24 timings) in sugarcane and soybean experiments, respectively. The persistence of sulfentrazone was evaluated by bioassay using sugar beet as test plant. In sugarcane field, the effects of sulfentrazone on sugar beet were detected up to 601 and 704 DAT for 0,6 and 1,2 kg a.i./ha, respectively. In soybean field the effects of the same rates were noticed up to 376 and 539 DAT. Concerning to the crops in succession to soybeans, the residues of sulfentrazone affected the growth and yield of millet and oats; sunflower and beans were not affected; wheat was affected by the higher rate, only. / Doutor

Orientador: Ruben Pablo Schocken-Iturrino / Banca: Alessandra Aparecida Medeiros / Banca: Hélio José Montassier / Banca: Anna Monteiro Correia Lima / Banca: Fernando Antônio de Ávila / Resumo: O presente estudo foi realizado com o intuito de desenvolver o PCR quantitativo para detecção dos níveis de mRNA da toxina botulínica tipo A em palmito. Foram desenhados primers para o gene codificador da toxina botulínica tipo A, os quais apresentaram especificidade e sensibilidade elevadas. Cepas referência de Clostridium botulinum tipo B, C, D, E, F, G e Clostridium butyricum, baratii e argentinense foram utilizadas para verificação da especificidade dos primers sintetizados. Diluições seriadas de cultura da cepa referência de Clostridium botulinum tipo A foram inoculadas em amostras de palmito e separadas em dois grupos: palmito comercial com conservantes e palmito sem conservantes e incubadas a 4°, 25° e 37°C. Alíquotas dessas amostras contaminadas experimentalmente foram submetidas a extração de RNA, para determinação do limiar de detecção da técnica de PCR quantitativo, assim como inoculadas em camundongos para o teste de toxicidade aguda (bioensaio). O bioensaio apresentou sensibilidade característica e detectou a presença da toxina botulínica nas amostras de palmito sem conservantes. No entanto, o PCR quantitativo, apresentou sensibilidade maior que aquela observada no bioensaio, detectando a expressão do gene para BoNT/A (botulinum neurotoxin type A) no tratamento de palmito sem conservantes e no tratamento de palmito comercial incubado a 37°C. Isto evidencia a possível utilização desta técnica no diagnóstico de contaminação de amostras de alimento por C. botulinum tipo A. / Abstract: The present study was realized in order to develop the quantitative assay for the detention of the levei mRNA of the botulinic toxin type A production in palm heart. Primers were designed for the gene encoding the botulinic toxin type A, which showed high specificity and sensitivity. Reference of strains of C. botulinum type S, c, D, E, F, G, C/ostridium butyricum, baratii and argentinense were used for verification of the specificity of the primers synthesized. Serial dilutions culture of the reference strain of C/ostridium botulinum type A were inoculated in the palm heart samples and separated in two groups: commercial palm heart (with preservatives) and palm heart without preservatives and incubated at 4°, 25° and 37°C. Aliquots these contaminated experimentally samples were subjected to extraction of RNA, for determination of the threshold of detection of the technique of quantitative PCR, well as inoculated into mice to test the acute toxicity (bioassay). The bioassay presented its characteristic sensitivity and detected the presence of the botulinic toxin in samples of palm heart without preservatives. However, the quantitative PCR presented greater sensibility than that observed in the bioassay, detecting the expression of the gene for SoNT/A (botulinic neurotoxin type A) in the treatment of palm heart without preservatives and treatment of commercial palm heart incubated at 37°C. This highlights the possible use of this technique in the diagnosis of contamination of samples the food by C. botulinum type A. / Doutor

Orientador: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: Cristina Lacerda Soares Petrarolha Silva / Banca: Sérgio Antonio de Bortoli / Resumo: Dentre os microrganismos empregados no controle de mosquitos, a bactéria Bacillus thuringiensis var. israelensis (Bti) se destaca por apresentar atividade tóxica contra insetos da ordem Diptera, na qual produz inclusões cristalinas compostas pelas proteínas Cry, que são codificadas por genes cry presentes em um único plasmídeo. A produção dessas proteínas em grande escala está relacionada a mecanismos transcricionais, como por exemplo, a expressão de um gene sob o controle de um promotor forte. Tendo em vista que a bactéria Bti SPS1 (Patente PI0200228-0) foi isolada do território brasileiro e que possui potencial para o controle de vetores por produzir uma maior quantidade de esporos/cristais em menor tempo, este trabalho teve por finalidade a caracterização da região promotora dos genes cry4Aa, cry4Ba e cry11Aa de Bti SPS1 pelas técnicas de PCR e "Southern blotting". Em associação a estas técnicas, foi realizado bioensaio para a verificação da mortalidade de larvas de Aedes aegypti. Os resultados das análises moleculares indicaram homologia no perfil de hibridização da região promotora da linhagem padrão Bti T14-001 e do isolado Bti SPS1. A quantificação das suspensões em espectrofotômetro (DO600nm) e a leitura de esporos em câmara de Neubauer, revelaram que o isolado Bti SPS1 produz uma maior quantidade de esporos/cristais em relação à linhagem padrão Bti T14-001. O bioensaio apresentou elevados índices de mortalidade. Estes resultados tornam a bactéria Bti SPS1 uma fonte promissora para novas formulações visando o controle de vetores. / Abstract: Among the microorganisms used for mosquitoes' control the bacterium Bacillus thuringiensis var. israelensis (Bti) is frequently considered since it presents toxic activities' against Diptera, producing crystal inclusions including Cry proteins, which are coded by a sole plasmid borne set of genes. The production of these proteins in large scale is related to transcriptional mechanisms, as an example, a particular gene expression controlled by a strong promoter. Since the Bti bacterial isolate SPS1 (Patent PI0200228-0) was isolated within the Brazilian territory and exhibits potential for the control of vector insects due to a higher crystal production ability in shorter time period, this work had as objective the characterization of the promotion region for the genes cry4Aa, cry4Ba e cry11Aa using PCR and "Southern blotting" techniques. Also some bioassays using Aedes aegypti larvae were carried out. The results from the molecular analysis have indicated homology for the hybridization profile from the promoter region from the type strain of Bti T14-001 and that of the SPS1 isolate. Spectrofotometric (OD600nm) and Neubauer chamber measures have revealed that the SPS1 isolate produces a higher amount of spore/crystal as compared to the Bti T14-001 strain. The bioassay presented higher mortality levels. These results seem to indicate that the isolate SPS1 is a promising bacterial strain to be used on formulations able to control insect vector pests. / Mestre