Orientador: Kátia Denise Saraiva Bresciani / Co-orientador: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Jancarlo Ferreira Gomes / Banca: Suely Regina Mogami Bomfim / Resumo: om o objetivo de determinar a ocorrência e caracterizar molecularmente a infecção por Cryptosporidium spp. em bezerros bubalinos do Estado de São Paulo, Brasil, foram colhidas 222 amostras fecais de animais da raça Murrah, com até seis meses de idade. As amostras foram avaliadas pela técnica de Ziehl-Neelsen modificada e por meio da reação em cadeia da polimerase tipo nested (nPCR) para amplificação de fragmentos de DNA da subunidade 18S do gene do RNA ribossômico e sequenciamento dos fragmentos amplificados. Pela técnica de Ziehl-Neelsen modificada, foi detectada positividade de 8,1% (18/222), e pela nPCR, foi observada amplificação em 48,2% (107/222) das amostras, das quais 63 foram sequenciadas. A análise das sequências obtidas mostrou que a espécie mais frequente nesses animais foi Cryptosporidium ryanae, em bezerros bubalinos a partir de cinco dias de idade. A espécie zoonótica Cryptosporidium parvum foi detectada em apenas um animal e um genótipo incomum, similar a Cryptosporidium sp. W20486, foi encontrado, pela primeira vez em búfalos / Abstract: With the aim of determining the occurrence and molecularly characterizing infection by Cryptosporidium spp. in buffalo calves from São Paulo State, Brazil, 222 fecal samples were collected from Murrah animals aged up to six months. The samples were assessed by means of modified Ziehl-Neelsen technique and nested polymerase chain reaction (nPCR) for amplification of DNA fragments from subunit 18S of the gene of ribosomal RNA and sequencing of the amplified fragments. The modified Ziehl-Neelsen technique indicated 8.1% positivity (18/222), while nPCR revealed amplification for 48.2% (107/222) samples, of which 63 were sequenced. The analysis of the obtained sequences showed that the most frequent species in these animals was Cryptosporidium ryanae, present in buffalo calves from five days of age. The zoonotic specie Cryptosporidium parvum was detected in only one animal, and an uncommon genotype, similar to that of Cryptosporidium sp. W20486, was found for the first time in buffaloes / Mestre

Orientador: Alessandro Francisco Talamini do Amarante / Banca: Kátia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Lucia Helena O'Dwyer de Oliveira / Resumo: Infecções por nematódeos gastrintestinais causam consideráveis perdas na pecuária. Haemonchus spp. é o principal nematódeo que acometem bovinos e ovinos principalmente em regiões tropicais e subtropicais. Portanto este estudo teve por objetivo avaliar metodologias de diagnóstico baseado em analises morfológicas e moleculares de larvas infectantes e adultos de Haemonchus spp. Foram utilizados 23 bezerros e 20 cordeiros naturalmente infectados por nematódeos gastrintestinais. Antes da necropsia dos animais, fezes foram coletadas para realização de coproculturas e obtenção de larvas infectantes, que foram morfometricamente analisadas. Logo após o sacrifício dos animais, os abomasos foram removidos e congelados, para posterior recuperação dos exemplares de Haemonchus spp. que foram armazenados em álcool 70º. No caso dos ovinos, os parasitas permaneceram estocados em alcool 70º por mais de um ano antes de serem analisados, enquanto que os parasitas dos bovinos foram armazenados por apenas quatro meses. O diagnóstico morfológico dos Haemonchus machos foi realizado por meio da análise de sínlofe e mensuração de espículos. Os mesmos parasitas utilizados na análise morfológica foram submetidos à análise molecular, com utilização da PCR, com os primers 52/154, 75/86 e Hplacbotu. A técnica padrão ouro para identificação de Haemonchus similis foi análise de espículos e para Haemonchus placei foi PCR com os primes HplacBotu. Todas as amostras de ovinos foram consideradas como sendo de Haemonchus contortus, devido à especificidade parasitária e nenhuma evidencia de outras espécies de Haemonchus nas análises moleculares. Os resultados demonstraram diferença estatística no comprimento da distância entre o final da L3 e o final da bainha das larvas infectantes das três espécies. Houve sobreposição de medidas de apenas 1,26% entre as espécies H. placei e H. contortus. Na análises moleculares o par ... / Abstract: Nematodes gastrointestinal infection causes considerable losses in the livestock industry. Haemonchus spp. is major nematode that affects cattle and sheep mainly in tropical and subtropical region. Therefore, the aim of the present study was to assess diagnosis methodologies based in morphological and molecular analysis of infective larvae and adults of Haemonchus spp. Twenty-three calves and twenty lambs naturally infected with gastrointestinal nematodes were utilized. Before necropsy of animals, faecal samples were collated for preparing faecal cultures and obtaining infective larvae that were morphometrically analyzed. After the euthanasia of animals the abomasums were removed and frozen for posterior recovered Haemonchus specimens that were stored in alcohol 70º. In the case sheep, the parasites remained stored in alcohol 70º for more than one year before be analyzed, while the parasites of cattle were stored for only four months. The morphological diagnosis of males Haemonchus spp. was released by synlophe analysis and spicule measurements. The same parasites used in the morphological analysis were submitted in the molecular analysis, using PCR, with primers 52/159, 75/86 and HplacBotu. The "gold standard" method used to identify Haemonchus similis was spicules analysis and to identify Haemonchus placei was PCR with the primers HplacBotu. All Haemonchus specimens recovered from sheep were assumed to be Haemonchus contortus based on host specificity, and because the molecular analysis did not show any evidence of other Haemonchus species. The results presented statistic differences in the sheath tail length of infective larvae of three species. There was overlapping of measurements was only 1.26% between H.contortus and H. placei. In the espicule analysis also were observed same overlapping of measurements that caused misidentification of H. placei and H. contortus. In relation the synlophe most samples ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-05-29Bitstream added on 2014-08-13T18:01:01Z : No. of bitstreams: 1 000748720.pdf: 303977 bytes, checksum: 7ba6d61e50abff8a0af0b6c3f7aca23e (MD5) / Toxoplasma gondii é um protozoário parasito intracelular obrigatório, amplamente distribuído pelo mundo, sendo responsável por perdas na produção animal e sério problema de saúde pública. Os produtos cárneos podem albergar formas infectantes de diversos agentes zoonóticos, sendo um deles os bradizoítos de T. gondii. Deste modo, o presente estudo objetivou determinar a presença de T. gondii em produtos cárneos comercializados na região de Botucatu, SP, Brasil. Foram analisados 141 cortes comerciais de carne suína, sendo 49 de pernil (34,75%); 48 de músculo traseiro bovino (34,04%) e de quibe cru (44; 31,21%), com as técnicas de bioensaio em camundongos, e pesquisa do DNA do parasito pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) do gene repetitivo 200-300x no genoma, amplificando 529pb. Todas as amostras foram negativas ao bioensaio. Das amostras positivas à PCR, foram pesquisadas a carga parasitária pela PCR quantitativa (qPCR) do mesmo gene, utilizando-se sistema SYBR Green, e genotipagem pela multiplex-, nested- e RFLP- PCR utilizando 11 marcadores: SAG1, 5’-3’SAG2, alt.SAG2, SAG3, B-TUB, GRA6, L358, c22-8, c29-6, PK1, Apico. Das amostras estudadas, nove (6,38%) foram positivas à PCR, sendo cinco (55,56%) bovinas, três (33,33%) suínas e uma (11,11%) de quibe, apresentando carga parasitária com medianas variando de zero até 390 parasitos.mL-1. A genotipagem foi possível em somente uma amostra que apresentou genótipo semelhante a outros já identificados na literatura (MAS, TgCkBr89 e TgCkBr147). Adicionalmente, nested- e RFLP-PCR do gene 18S ribossomal RNA (18S rRNA), sequenciamento dos produtos da nested-PCR e alinhamento com a base de dados do GenBank no NCBI foram realizados para todas as nove amostras positivas para verificar a possibilidade de co-infecção com outros protozoários Apicomplexa, resultando em 100% de homologia com T. gondii em quatro amostras, sendo três suínas e um quibe ... / Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan parasite, widely distributed throughout the world, accounting for losses in animal production and serious public health problem. The meat products may harbor infectious forms of various zoonotic agents, one of them being the bradyzoites of T. gondii. Thus, the present study aimed to determine the prevalence of T. gondii in meat products marketed in Botucatu, SP, Brazil. We analyzed 141 commercial cuts of pork (ham, 49; 34.75%) and beef (muscle, 48, 34.04%), and raw kibbe (44, 31.21%) by bioassay in mice, and survey of parasite DNA by polymerase chain reaction (PCR) gene repetitive 200- 300x in the genome, amplifying 529bp. All samples were negative by bioassay. Of the PCR-positive samples were studied parasite load by quantitative PCR (qPCR) of the same gene, using the SYBR Green system and the multiplex genotyping, nested PCR and RFLP markers using 11: SAG1, 5'-3 ' SAG2, alt.SAG2, SAG3, B-TUB, GRA6, L358, c22-8, c29-6 PK1, Apico. Of the samples studied, nine (6.38%) were positive for PCR, five (55.56%) for cattle, three for pork (33.33%) and one for raw kibbe (11.11%), with median parasite load ranging from 16 to 390 parasitos.mL-1. Genotyping was possible in only one sample that showed genotype similar to those already identified in the literature (MAS, TgCkBr89 and TgCkBr147). In addition, nested PCR and RFLP gene 18S ribosomal RNA (18S rRNA) sequencing of the nested-PCR products and alignment to the GenBank database at NCBI were performed for all nine positive samples to verify the possibility of co-protozoa infection with other Apicomplexa, resulting in 100% homology with T. gondii in four samples, three from pork meat sows and one from kibbe (44.44%; GenBank accession number L37415.1), Sarcocystis hominis was foundin two samples of cattle (22.22%, GenBank accession number AF006471.1), Sarcocystis cruzi in two samples of beef (22.22%; GenBank ...