Orientador: Prof. Dr. Marcelo Augusto Christoffolete / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2014. / A obesidade é um problema global alarmante, sendo um fator desencadeador de outras enfermidades, como doenças cardiovasculares e diabetes do tipo II. Para que ocorra a proliferação do tecido adiposo, responsável pelo acúmulo de gordura característico da obesidade, é preciso que as células que o compreendem se diferenciem de pré-adipócitos em adipócitos maduros, passando por drásticas mudanças morfológicas, reguladas pela expressão gênica de fatores de transcrição, até que estejam prontos para estocar triglicerídeos e liberar ácidos graxos além de responder a hormônios como a insulina e glicocorticóides. A regulação da expressão de alguns desses fatores já é conhecida, porém há muito ainda para se desvendar sobre o processo de adipogênese. Sabe-se que as catepsinas K, L e S são alguns desses fatores que regulam o processo da formação do tecido adiposo. Além de estudos já relacionarem estas enzimas com a clivagem da leptina, hormônio que é responsável por sinalizar ao Sistema Nervoso Central (SNC) sobre o status energético, promovendo a saciedade e o aumento do gasto energético, este hormônio, ainda está ligado à inibição da adipogênese. Desta forma, este trabalho propõe a análise da expressão das enzimas CatK, CatL e CatS durante o processo de diferenciação de células 3T3-L1, relacionando a expressão detectada nos dias de diferenciação com fatores de transcrição envolvidos no processo e marcadores de diferenciação já reconhecidos pela literatura. / Obesity is a global problem alarming, as a trigger for other cardiovascular diseases and type II diabetes factor. For the proliferation of adipose tissue responsible for this accumulation of fat occurs it is necessary that the cells that comprise to differentiate from preadipocytes into mature adipocytes undergoing drastic morphological changes of gene expression regulated by transcription factors until they are ready to store triglycerides and free fatty acids , as well as respond to hormones such as insulin and glucocorticoids . The regulation of expression of some of these factors is already known, but there is still much to uncover about the process of adipogenesis. It is known that cathepsin K, L and S are some of the factors that regulate the process of formation of adipose tissue. In addition to studies already relate these enzymes with cleavage of leptin, a hormone that is responsible for signaling the Nervous System on the energy status, promoting satiety and increased energy expenditure, this hormone is still on the inhibition of adipogenesis. Thus, this paper proposes the analysis of the expression of CatK, CatL and CatS enzymes during the differentiation of 3T3 - L1 cells, correlating expression detected on days of differentiation with transcription factors involved in the process and differentiation markers already recognized by literature

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-06-27T19:16:23Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) José Luiz de Figueiredo_TESE DE DOUTORADO_SA.pdf: 20285168 bytes, checksum: 2ae5d11950e2cb6dc18e886511b1c189 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-27T19:16:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) José Luiz de Figueiredo_TESE DE DOUTORADO_SA.pdf: 20285168 bytes, checksum: 2ae5d11950e2cb6dc18e886511b1c189 (MD5) Previous issue date: 2015-08-24 / Doença renal crônica acelera o desenvolvimento de ateroscleroses. A catepsina S é uma potente protease que quebra as fibras de elastina na parede das artérias e gera peptídeos bioativos de elastina, promovendo inflamação e calcificação vascular. Objetivo: Verificar os efeitos da inibição seletiva da catepsina S nas ateroscleroses de camundongos deficientes em apolipoproteína E (ApoE-/-) com doença renal crônica. Método: A doença renal crônica foi induzida por nefrectomia subtotal (5/6) em camundongos ApoE-/-, alimentados com uma dieta com alto teor de gorduras e colesterol. Os camundongos hipercolesterolêmicos, com doença renal crônica receberam essa dieta misturada com 6,6 ou 60 mg / kg do inibidor seletivo da catepsina S - RO5444101 ou a mesma dieta sem o inibidor seletivo da catepsina S (controle). Resultados: Camundongos com doença renal crônica tinham níveis plasmáticos significativamente mais elevados de osteopontina, osteocalcina e osteoprotegerina (204%, 148%, e 55%, respectivamente; p<0,05), que foram inibidos pelo RO5444101 (60%, 40%, e 36%, respectivamente; P<0,05). Imagens moleculares fluorescentes revelaram uma redução significativa na atividade da catepsina em camundongos tratados. O RO5444101 diminuiu também a atividade osteogênica. Avaliação histológica na placa aterosclerótica demonstrou que o RO5444101 reduziu a imunorreatividade da catepsina S (P<0,05), a degradação da elastina (P=0.01), o tamanho da placa (P=0.01), a acumulação de macrófagos (P<0,01), o fator de diferenciação do crescimento-15 (P=0.0001), a calcificação (atividade da fosfatase alcalina), P<0,01; e a osteocalcina, P<0,05). Além disso, o inibidor da catepsina S ou o siRNA significativamente diminuiu a expressão do fator de diferenciação do crescimento-15 e a proteína quimiotáctica de monócitos-1 numa linha de células de macrófagos de camundongos e macrófagos primários humanos. Conclusão: A inibição seletiva da catepsina S atenua a progressão de lesões ateroscleróticas em camundongos deficientes em apolipoproteína E com doença renal crônica. / Chronic kidney disease accelerates the development of atherosclerosis. Cathepsin S is a potent protease that cleaves elastin in the arteries wall and generates bioactive elastin peptides, promoting vascular inflammation and calcification. Objective: To verify the effects of selective inhibition of cathepsin S in atherosclerosis in apolipoprotein E deficient (ApoE-/-) mice with chronic kidney disease. Methods: chronic kidney disease was induced by a subtotal (5/6) nephrectomy in a high-fat high-cholesterol fed ApoE-/- mice. Hypercholesterolemic mice with CRD received a diet admixed with 6.6 or 60 mg/kg of the selective cathepsin S inhibitor RO5444101 or a diet without the selective inibidor of the catepsina S (control). Results: chronic kidney disease mice had significantly higher plasma levels of osteopontin, osteocalcin, and osteoprotegerin (204%, 148%, and 55%, respectively; P<0.05), which were inhibited by RO5444101 (60%, 40%, and 36%, respectively; P<0.05). Near-infrared fluorescence molecular imaging revealed a significant reduction in cathepsin activity in treated mice. RO5444101 decreased osteogenic activity. Histologic assessment in atherosclerotic plaque demonstrated that RO5444101 reduced immunoreactive cathepsin S (P<0.05), elastin degradation (P<0.01), plaque size (P<0.01), macrophage accumulation (P<0.01), growth differentiation factor-15 (P<0.0001), and calcification, alkaline phosphatase activity, (P<0.01); osteocalcin, (P<0.05). Furthermore, cathepsin S inhibitor or siRNA significantly decreased expression of growth differentiation factor-15 and monocyte chemotactic protein-1 in a murine macrophage cell line and human primary macrophages. Conclusion: The selective inhibition of cathepsin S attenuates the progression of atherosclerotic lesions in apolipoprotein E deficient mice with chronic kidney disease