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Estudos da influência de mudanças conformacionais e carga líquida na atividade enzimática de uma celulase termoestável

Souza, Thaís Vieira de January 2017 (has links)
Orientador: Prof. Dr. Wanius José Garcia da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2017. / CelE1 é uma endoglucanase, pertencente à família GH5, altamente ativa em ampla faixa de temperaturas e em condições alcalinas de pH. Foram examinamos os efeitos do pH sobre as estruturas secundárias e terciárias, carga líquida, e a atividade de CelE1. Embora a variação do pH tenha mostrado um pequeno efeito na estrutura da enzima, a atividade foi influenciada em condições ácidas, enquanto que atingiu a atividade ótima em pH 8. A fim de verificar a possibilidade de aplicação industrial como aditivo de detergentes, a atividade da enzimática da CelE1 foi avaliada na presença de agentes tensoativos. Surfactantes iônicos e não iônicos não foram capazes de reduzir significativamente a atividade CelE1. Portanto, notou-se que CelE1 pode ser uma candidata promissora para utilização como aditivos de detergentes. Foi relatada uma análise termodinâmica com base na estabilidade estrutural e química dos processos de desnaturação e renaturação da enzima. Os resultados indicaram que A enzima CelE1 apresenta atividade em temperaturas baixas e ambientes, em condições alcalinas e na presença de surfactantes, além de ter a capacidade de se desnaturar e renaturar, em diferentes concentrações de ureia. O processo de desnaturação e renaturação da CelE1 mostrou-se ser um processo reversível de dois estados. Estes dados podem ser úteis para aplicações biotecnológicas. / CelE1 is a cold-active endo-acting glucanase with high activity at a broad temperature range and under alkaline conditions. Here, we examined the effects of pH on the secondary and tertiary structures, net charge, and activity of CelE1. Although variation in pH showed a small effect in the enzyme structure, the activity was highly influenced at acidic conditions, while reached the optimum activity at pH 8. Furthermore, to estimate whether CelE1 could be used as detergent additives, CelE1 activity was evaluated in the presence of surfactants. Ionic and nonionic surfactants were not able to reduce CelE1 activity significantly. Therefore, CelE1 was found to be promising candidate for use as detergente additives. Finally, we reported a thermodynamic analysis based on the structural stability and the chemical unfolding/refolding process of CelE1. The results indicated that the chemical unfolding proceeds as a reversible two-state process. These data can be useful for biotechnological applications.

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