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Imunogenicidade vacinal de proteína recombinante constituída de epitopos dominantes e subdominantes de Anaplasma marginale avaliados em camundongos Balb/c

Cangussu, Alex Sander Rodrigues 18 December 2015 (has links)
Submitted by Bianca Neves (oliveirabia1@ymail.com) on 2016-04-20T18:38:24Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Alex Sander Rodrigues Nogueira- reprodução parcial.pdf: 161115 bytes, checksum: 3caf890689ff035dfb2d21540b375365 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-04-25T17:49:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Alex Sander Rodrigues Nogueira- reprodução parcial.pdf: 161115 bytes, checksum: 3caf890689ff035dfb2d21540b375365 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-04-25T17:53:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Alex Sander Rodrigues Nogueira- reprodução parcial.pdf: 161115 bytes, checksum: 3caf890689ff035dfb2d21540b375365 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-25T17:53:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Alex Sander Rodrigues Nogueira- reprodução parcial.pdf: 161115 bytes, checksum: 3caf890689ff035dfb2d21540b375365 (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / Não informada / The bovine anaplasmosis is a disease characterized by severe anemia, fever, weight loss, decreased milk production, abortion and death in the animals. It is caused by A. marginale and transmitted by ticks, leading severe economic losses in cattle production and hence strategies for developing vaccines are essential to minimize its impact. In this study, a chimeric protein was produced by synthetic DNA, carrying sequences of predicted epitopes from OMP7, OMP9 and MSP1a, and used as vaccine emulsified with ISA adjuvant. After three doses, Balb/c mice were challenged with 3x105cel/mL A. marginale UFMG2 to assess proctetion of compound MSP1a/OMP7/9+ISA. There were not body weight alterations neither clinical signs were observed in immunized mice. Bacteremia count showed drastic reduction and discrete alteration on erythrocyte morphology (spherocytes) in vaccined mice 56th day after challenge. No alteration was observed in hematologic data in relation to infected control mice. The evaluation obtained in this study showed the importance of the MSP1a /OMP7/9 protein in the immune response of the Balb/c and your applicability potential in the recombinant vaccine production. / A anaplasmose bovina é uma enfermidade causada por uma rickettsia denominada Anaplasma marginale (A. marginale) transmitida por carrapatos e a doença se caracteriza por anemias, febre, perda de peso, diminuição da produção de leite, aborto e morte nos animais. A doença causa perdas econômicas na produção de gado e por isso estratégias para o desenvolvimento de vacinas é imprescindível para minimizar seu impacto. Neste estudo uma proteína recombinante de A.marginale foi produzida a partir de uma estratégia inovadora de utilizar DNA sintetico para codificar os epítopos dos principais antígenos de A.marginale. Após a clonagem em pGEM e subclonagem em pHT43, a proteína quimérica foi expressa em Escherichia coli contendo epítopos dos antigenos OMP7/9 (outer membrane protein 7/9) e MSP1a (major surface protein 1a). A antigenicidade foi comprovada pela reatividade da proteina recombinante com soro de bezerro com anaplasmose, e a imunogenicidade e proteção vacinal foi comprovada em camundongos Balb/c. Com uma fórmula composta com adjuvante oleoso (MSP1a/OMP7/9+ISA), animais receberam três (3) doses vacinais e desafiados com 3x105cel/mL de A. marginale UFMG2. Os animais imunizados não apresentaram variação de peso corporal nem sinais clínicos da doença, porém houve redução significativa da carga bacterêmica nos vacinados (p<0,0008) comparados com grupos placebos. Além disso, não houve alterações hematológicas como aumento no número de monócitos (p<0,005), neutrófilos (p<0,05) e leucocitose (p<0,05), verificadas nos controles infectados. As avaliações deste trabalho demonstraram a importância da proteína recombinante MSP1a/OMP7/9 na melhoria da resposta imunológica de Balb/c e sua potencial aplicabilidade na produção de vacinas recombinantes.

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