Thesis (M.S.)--University of Michigan, 1983.

Thesis (Ph. D.)--University of Wisconsin--Madison, 1953. / Typescript. Vita. eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references (leaves 57-58).

Thesis (doctoral)--University of Stockholm, 1983. / Bibliography: p. 36-39.

Thesis - Amsterdam.

Pesquisas prévias evidenciaram que a desmineralização óssea com ácido cítrico melhora a consolidação de enxertos autógenos em bloco e favorece o espalhamento e a morfologia de pré-osteoblastos em cultura. Os resultados promissores encontrados com o ácido cítrico levantaram a suspeita de que a tetraciclina ácida pudesse suscitar efeitos semelhantes. Assim, este estudo se propôs a avaliar comparativamente o comportamento de células pré-osteoblásticas MC3T3-E1 cultivadas sobre superfícies ósseas de calvária de ratos desmineralizadas com tetraciclina ácida (50mg/mL) e com ácido cítrico (10%, pH1) em diferentes tempos de aplicação. Foram removidas 126 amostras ósseas bicorticais da calvária de 63 ratos Wistar adultos machos empregando broca trefina de 5 milímetros de diâmetro. As amostras foram distribuídas aleatoriamente em um dos seguintes grupos de estudo (n=18): AC 15 no qual as amostras foram desmineralizadas por ácido cítrico durante 15 segundos; AC 30, no qual as amostras foram desmineralizadas por ácido cítrico durante 30 segundos; AC 60, no qual as amostras foram desmineralizadas por ácido cítrico durante 60 segundos; TCN 15 no qual as amostras foram desmineralizadas por tetraciclina durante 15 segundos; TCN 30, no qual as amostras foram desmineralizadas por tetraciclina durante 30 segundos; TCN 60, no qual as amostras foram desmineralizadas por tetraciclina durante 60 segundos e C, grupo controle formado por amostras não desmineralizadas. Os pré-osteoblastos foram cultivados sobre as amostras por 24, 48 e 72 horas (n= 6) para serem examinadas à microscopia eletrônica de varredura. Vinte e uma amostras coletadas de outros 11 animais foram distribuídas entre os mesmos grupos e analisadas com espectroscopia de energia dispersiva (EDS) para análise da composição química superficial (n=3). A área de recobrimento superficial por células foi significantemente maior após 24 e 48 horas de cultura nos grupos AC15 (60,38% e 100% respectivamente), AC30 (99,32% e 100% respectivamente), AC60 (99,22% e 100% respectivamente), TCN15 (96,73% e 70,24% respectivamente) e TCN30 (64,72% e 57,40% respectivamente) do que nos grupos TCN60 (9,67% e 51,45% respectivamente) e C (5,99% e 31,83% respectivamente). Às 72 horas os grupos apresentaram recobrimento praticamente completo das superfícies ósseas por células, com exceção do grupo TCN60 (56,15%). As células apresentaram-se com morfologia compatível com em estágios mais avançados de diferenciação nos grupos que sofreram desmineralização do que no controle. As variações nas porcentagens anatômicas (A%) dos elementos C, O, Na, Mg, P e Ca foram insuficientes para justificar mudanças no comportamento celular. Concluiu-se que a desmineralização quer por ácido cítrico ou tetraciclina de superfícies ósseas são favoráveis para o crescimento e diferenciação de células pré-osteblásticas especialmente quando empregada conforme os grupos AC30 e TCN15. Os mecanismos por trás desses resultados ainda carecem de elucidação. / Previous researches have demonstrated that bone demineralisation by citric acid improves the consolidation of bone autografts and promotes spreading and morphology of pre-osteoblasts in culture. The promising results with citric acid raised the suspicion that tetracycline could elicit similar effects. Thus, the aim of this study was to comparatively evaluate the behavior of pre-osteoblastic MC3T3-E1 cultured on bone surfaces of rat calvaria demineralized with tetracycline (50mg / ml) and citric acid (10%, pH1) at different times of application. 126 bicortical samples were removed from the calvarial bone of 63 adult male Wistar rats using trephine drill of 5 mm in diameter. Samples were randomly assigned to one of the following study groups (n = 18) AC 15 in which the samples were demineralized by citric acid for 15 seconds; AC 30, in which the samples were demineralized by citric acid for 30 seconds; AC 60 wherein the samples were demineralized by citric acid for 60 seconds; TCN 15 in which the samples were demineralized tetracycline for 15 seconds; TCN 30, in which the samples were demineralized tetracycline for 30 seconds; TCN 60 wherein the samples were demineralized tetracycline for 60 seconds, and C, control group of samples not demineralized. The pre-osteoblasts were cultured on the samples for 24, 48 and 72 hours (n = 6) to be examined in the scanning electron microscope. Twenty-one samples were collected from other 11 animals and were distributed among the same groups for analysis of the surface chemical composition by energy dispersive spectroscopy (EDS) (n = 3). The average percentage of the bone surfaces covered by cells was significantly higher after 24 and 48 hours of culture in groups AC15 (60.38% and 100% respectively), AC30 (99.32% and 100% respectively), AC60 (99.22% and 100% respectively) TCN15 (96.73% and 70.24% respectively) and TCN30 (64.72% and 57.40% respectively) than in groups TCN60 (9.67% and 51.45% respectively), and C (5.99% and 31.83% respectively). At 72 hours, all the groups presented almost complete covering of the surfaces by cells, with the exception of TCN60 group (56.15%). Cells presented with morphology compatible with more advanced stages of differentiation in groups undergone to demineralization than control. Variations in the anatomical percentages (A%) of the elements C, O, Na, Mg, Ca and P were insufficient to justify changes in cell behavior. The conclusion was that both demineralization of citric acid or tetracycline are favorable for the growth and differentiation of pre-osteoblasts especially when used according to AC30 and TCN15 groups. The mechanisms behind these results still need elucidation.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:43:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:05:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 06124.pdf: 4912252 bytes, checksum: a10b5a0b5037f2df963acd926b7b2c97 (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / As metaloproteinases sÃo enzimas capazes de degradar o colÃgeno exposto na interface dentina/resina provocando sÃrios danos à manutenÃÃo da integridade da interface adesiva. Este estudo està dividido em trÃs capÃtulos, cujos objetivos foram: 1) Avaliar o efeito da desmineralizaÃÃo atravÃs de diferentes Ãcidos na ativaÃÃo de MMP-2 em dentina humana (CapÃtulo 1); 2) Avaliar o efeito de um sistema adesivo de passo Ãnico na ativaÃÃo de MMP-2 e -9 dentinÃria usando zimografia in situ e teste de atividade enzimÃtica; 3) Avaliar a capacidade do agente de ligaÃÃo cruzada 1-etil-3-(3-dimetilaminopropril) carbodiamida (EDC) na inibiÃÃo da atividade das MMPs em dentina (CapÃtulo 3). Como abordagens metodolÃgicas foram realizados 3 estudos in vitro com avaliaÃÃo enzimÃtica em dentina humana. ProteÃna dentinÃria foi extraÃda apÃs desmineralizaÃÃo com os Ãcidos fosfÃrico a 1% e a 10% e cÃtrico a 10% por 1, 5 e 10 min, e submetida a zimografia gelatinosa e teste de anÃlise enzimÃtica especifica, para a avaliaÃÃo da atividade de MMP-2 (CapÃtulo 1). Dentina em pÃ/blocos foi tratada com o adesivo de passo Ãnico Adper Easy Bond (3M ESPE) e a atividade de MMP-2 e -9 foi avaliada atravÃs de zimografia in situ e quantificada atravÃs do ELISA (CapÃtulo 2). Dentina em pÃ/blocos foi tratada com os sistemas adesivos Optibond FL ou Scotchbond 1XT com ou sem tratamento prÃvio com EDC. A atividade enzimÃtica foi analisada atravÃs de zimografia gelatinosa e in situ (CapÃtulo 3). A atividade de MMP-2 esteve presente em todos os grupos testados e aumentou apÃs desmineralizaÃÃo com Ãcido fosfÃrico 10% e Ãcido cÃtrico 10% (CapÃtulo 1). ApÃs tratamento com o adesivo de passo Ãnico, houve aumento da atividade enzimÃtica dentinÃria. A anÃlise in situ mostrou que a aÃÃo das MMPs està associada ao colÃgeno exposto e nÃo protegido pelos monÃmeros adesivos (CapÃtulo 2). Zimograma revelou um aumento na expressÃo de MMP-2 e -9 apÃs a exposiÃÃo aos sistemas adesivos, enquanto o uso de EDC 0.3M como prÃtratamento, inativou as gelatinases dentinÃrias (CapÃtulo 3). Pode-se concluir que tanto soluÃÃes Ãcidas (CapÃtulo 1), quanto os adesivos autocondicionantes sÃo capazes de ativar as MMPs dentinÃrias (CapÃtulo 2) e que algumas substÃncias, como o agente de ligaÃÃo cruzada EDC, sÃo capazes de inibir a ativaÃÃo destas enzimas (CapÃtulo 3). / MMPs are enzymes that can degrade exposed collagen in dentin/resin interface causing serious damage to maintaining the integrity of the adhesive interface. The present study is divided in three chapters, whose aims: 1) To evaluate the effect of demineralization by different acid solutions in MMP-2 activation on human dentin (Chapter 1); 2) To evaluate the effect of a one-step adhesive system on dentinal MMP-2 and -9 activation using in situ zymography and an enzymatic activity assay (Chapter 2); and 3) To evaluate the ability of MMPs inhibition by 1-ethyl-3-(3- dimethylaminopropryl) carbodiimide (EDC) EDC cross-linker on dentin (Chapter 3). As for the methodology approaches, 3 in vitro studies were performed to evaluate enzymatic expression of human dentin. Dentin protein was extracted after demineralization by 1% phosphoric acid, 10% phosphoric acid and 10% citric acid for 1, 5 and 10 minutes, and subjected to gelatin zymographic and activity assay (Chapter 1). Dentin powder/slabs were treated with one-step adhesive Adper Easy Bond (3M ESPE) and MMP-2 and -9 activities were evaluated using in situ zymography and quantified by means of an specific enzymatic assay (Chapter 2). Dentin powder/slabs were treated with one of those adhesive systems: Optibond FL or Scotchbond 1XT with or without pre-treatment using EDC. The enzymatic activity was analyzed using gelatin zymography and in situ zymography (Chapter 3). MMP-2 activity was present in all tested groups and increased after demineralization by 10% phosphoric acid and 10% citric acid (Chapter 1). After treated with one-step adhesive, enzymatic activity increased. In situ evaluation showed that MMPs action is associated with the exposed and unprotected collagen promoted by adhesive monomers (Chapter 2). Zymograms revealed increased expression of dentin endogenous MMP-2 and -9 after adhesives systems application, while the use of 0.3M EDC as a primer, inactivated dentin gelatinizes (Chapter 3). It can be concluded that both acid solutions (Chapter 1) and self-etch adhesives (Chapter 2) are able to activate dentin MMPs and that solutions like EDC cross-linker can inhibit the activation of those enzymes (Chapter 3).

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:43:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:05:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 06124.pdf: 4912252 bytes, checksum: a10b5a0b5037f2df963acd926b7b2c97 (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

A biomodificação radicular empregando ácido cítrico tem sido utilizada visando à reinserção dos tecidos periodontais a raízes expostas à doença periodontal. Entretanto, a grande diversidade metodológica entre os estudos ainda não possibilitou o estabelecimento de um protocolo amplamente aceito quanto à concentração e tempo de aplicação do ácido. Assim, 32 dentes extraídos por doença periodontal avançada forneceram 63 fragmentos radiculares que, após raspagem manual, foram divididos nos seguintes grupos de tratamento: Grupo AC-10-90: desmineralização com ácido cítrico a 10% em pH 1, durante 90 segundos; Grupo AC-10-120: desmineralização com ácido cítrico a 10% em pH 1, durante 120 segundos; Grupo AC-10-180: desmineralização com ácido cítrico a 10% em pH 1, durante 180 segundos; Grupo AC-50-90: desmineralização com ácido cítrico a 50% em pH 1, durante 90 segundos; Grupo AC-50-120: desmineralização com ácido cítrico a 50% em pH 1, durante 120 segundos; Grupo AC-50-180: desmineralização com ácido cítrico a 50% em pH 1, durante 180 segundos; Grupo C (controle): lavagem com soro fisiológico. Sobre as superfícies tratadas foram cultivados fibroblastos do ligamento periodontal humano por 24, 48 e 72 horas. A ampliação dos túbulos dentinários, morfologia celular e a porcentagem das superfícies radiculares recobertas por células foram avaliadas em microscopia eletrônica de varredura. As imagens microscópicas das superfícies recobertas por células foram comparadas pelo teste não paramétrico de Kruskal-Wallis seguido pelo teste de Dunn e na ampliação dos túbulos pelo teste de variância a dois critérios (ANOVA) complementado pelo teste de Tukey, em 5% de significância, ambos realizados por um programa computadorizado comparando os resultados entre os grupos. A Com exceção do grupo C, em todos os grupos houve aumento crescente da cobertura da superfície radicular por fibroblastos com o tempo. A maior área de cobertura foi apresentada pelo grupo AC-10-90 (98,82±2,57%) às 24 horas e essa diferença foi significante (p<0,001) em comparação aos grupos AC-50-90 (64,94±20,60%), AC-50-180 (56,59±35,42%) e C (0,06±0,24%). Nas demais comparações de tempo de aplicação e tempo de cultura, predominou a superioridade dos grupos tratados por ácido cítrico a 10% sobre os de 50%, porém, sem significância estatística. Todos os grupos teste foram significantemente superiores aos controle em todos os tempos de cultura. O menor valor médio para o diâmetro dos túbulos dentinários expostos pelos tratamentos foi apresentado pelo grupo AC-10-90 (4,55±0,69 &#x3BC;m) que diferiu significantemente (p<0,001) dos grupos AC-10-120 (5,33±0,95 &#x3BC;m), AC-10-180 (5,54±1,56 &#x3BC;m) e AC-50-180 (5,56±1,22 &#x3BC;m). Esse último apresentou a maior ampliação, porém sem diferença significante em relação aos demais grupos. Os fibroblastos apresentaram-se mais espalhados, achatados e com menor definição de limites nos grupos tratados com ácido cítrico a 10% do que nos de 50%, cujas células apresentavamse fusiformes e arredondadas. Concluiu-se que o ácido cítrico a 10% por 90 segundos produziu superfície mais favorável à proliferação celular com características morfológicas de estágios mais avançados de diferenciação e área de cobertura superficial por fibroblastos mais extensa no período inicial de cultura do que na concentração de 50%. A ampliação dos túbulos dentinários pareceu não influenciar a cobertura superficial por fibroblastos. Estudos subsequentes devem investigar a influência das propriedades químicas do agente biomodificador radicular para contribuir para a elucidação das diferenças produzidas no comportamento celular. / The root biomodification employing citric acid has been used in order to reattach periodontal tissues to root surface exposed to periodontal disease. However, the methodological diversity among studies has not allowed the establishment of a widely accepted protocol as the concentration and time of acid application. Thus, 32 teeth were extracted due to advanced periodontal disease, so that 63 root fragments were provided. After scaling and root planning, the fragments were divided into the following treatment groups : AC-10-90 group: demineralization with 10% citric acid at pH 1 for 90 seconds; AC-10-120 group: demineralization with 10% citric acid at pH 1 for 120 seconds; AC-10-180 group: demineralization with 10% citric acid at pH 1 for 180 seconds; AC-50-90 group: demineralization with 50% citric acid at pH 1 for 90 seconds; AC-50-120 group: demineralization with 50% citric acid at pH 1 for 120 seconds; AC-50-180 group: demineralization with 50% citric acid at pH 1 for 180 seconds; group C (control) : rinsing with saline solution. On the treated surfaces, fibroblasts from human periodontal ligament were cultured by 24, 48 and 72 hours. The enlargement of the dentinal tubules, cell morphology and the percentage of root surface covered by cells were evaluated by scanning electron microscopy. Those microscopic images from the root surfaces covered by cells were compared by the nonparametric Kruskal-Wallis test followed by Dunn\'s test and the enlargement of tubules by two variance (ANOVA) complemented by the Tukey test, both performed by a computer program comparing the results between the groups, at 5% significance. With the exception of group C, all groups showed increasing coverage of the root surface by fibroblasts over time. The largest area of coverage was presented by AC-10-90 (98.82±2.57%) at 24 hours and this difference was significant (p <0.001) compared to AC-50-90 (64.94±20.60%), AC-50-180 (56.59±35.42%) and C (0.06±0.24%). In other comparisons the application time and culture time groups treated with citric acid at 10% were superior to groups of 50%, without statistical significance. All test groups were significantly better than the control ones at all times of culture. The shortest average diameter of dentinal tubules exposed by the treatments was presented by AC-10-90 (4.55±0.69 &#x3BC;m) group that differed significantly (p<0,001) from AC-10-120 (5 groups 33±0.95 &#x3BC;m), AC-10-180 (5.54±1.56 &#x3BC;m) and AC-50-180 (5.56±1.22 &#x3BC;m). This last showed the highest enlargement, but without significant difference compared to the other groups. The fibroblasts were more spread, flattened and had less identifiable limits in the groups treated with citric acid 10% than those in 50% which cells had become rounded and spindle. It was concluded that the demineralization with 10% citric acid for 90 seconds produced more favorable surface to cell proliferation, more morphological characteristics of later stages of differentiation and larger surface area coverage by fibroblasts in the initial periods of culture than any of the groups treated with 50% citric acid. The enlargement of dentinal tubules did not seem to influence the surface coverage by fibroblasts. Subsequent studies should investigate the influence of the chemical properties of the root conditioner agent on the root surfaces in order to contribute to the elucidation of the differences produced in the cell behavior.

Most in vitro systems employ the standard cell culture maintenance conditions of 95 % air with 5 % CO2 to balance medium pH, which translates to culture oxygen tensions of approximately 20 % - above the typical ≤ 6 % found in most tissues. The current investigation, therefore, aims to characterize the effect of maintenance and toxicant exposure with a particular focus on the α,β-unsaturated aldehyde, acrolein, in the presence of physiologically relevant oxygen tension using a differentiated H9c2 cardiomyoblast subclone. H9c2 cells were maintained separately in 20.1 and 5 % oxygen, after which cells were differentiated for five days, and then exposed to acrolein in media containing varying concentrations of tricarboxylic acid and glycolytic substrates. Cells were then assessed for viability and metabolism via the MTT conversion assay. H9c2 cells were assessed for mechanistic elucidation to characterize contributors to cellular death, including mitochondrial membrane potential (ΔΨm) reductions (JC-1), intracellular calcium influx (Fluo-4), and PARP activation. Exposure to acrolein in differing oxygen tensions revealed that standard culture cells are particularly sensitive to acrolein, but cells cultured in 5 % oxygen, depending on the medium pyruvate concentration, can be rescued significantly. Further, reductions in ΔΨm were reversed by co-exposure of 5-10 mM EGTA for both culture conditions, while intracellular calcium transients were noted only for standard cultures. The results demonstrate significant metabolic reprogramming which desensitizes differentiated H9c2 to acrolein-induced cytotoxicity. Further, PARP and extracellular calcium contribute to the fate of these cells exposed to acrolein, though clotrimazole-associated TRPM2 channels may not be significantly involved. Conclusively, significant alteration of toxicogenic response was noted in this cell line when cultured under physiologically relevant conditions, and may have a substantial impact on the reliability and predictive power and interpretive application of in vitro-based toxicity models cultured under standard culture conditions, depending on the parent tissue.