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Purificação e Caracterização Parcial de uma Lectina da entrecasca da Caesalpinia ferrea var. leiostachya Benth

Siebra Paes Barreto, Raquel January 2007 (has links)
Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4593_1.pdf: 775991 bytes, checksum: 34d815fd2ad12a887f88057f75d91bd6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / As lectinas são proteínas ou glicoproteínas que se ligam reversivelmente a carboidratos com diferentes graus de seletividade, são encontradas em uma variedade de organismos e estão envolvidas em numerosos processos celulares. Neste trabalho foi avaliada a presença de lectina na entrecasca da Caesalpinia ferrea var. leiostachya Benth (CfeBL), planta com ampla distribuição no Brasil e conhecida vulgarmente como pau-ferro. Extrato bruto da entrecasca da C. ferrea foi obtido em NaCl 0,15 M. Este extrato foi submetido a fracionamento com sulfato de amônio (F 0-80%, F80) e ensaios de atividade hemaglutinante (AH) com diferentes tipos de eritrócitos. A fração F80 foi cromatografada em uma coluna de quitina que foi eluida, respectivamente, com NaCl 0,15M e ácido acético 1 M; CfeBL foi eluída com ácido acético 1M. A AH da CfeBL foi, então, avaliada em presença de íons divalentes (Ca++ , Mg++), diferentes valores de pH (2- 12), por carboidratos, glicoproteínas e ensaios da estabilidade térmica em diferentes temperaturas (30 100 ºC, por 30 minutos). A massa molecular da proteína nativa foi determinada usando uma coluna de Superdex 75-30 cm. Amostras da CfeBL foram submetiads a SDSPAGE em condições desnaturantes e redutoras. Eletroforese bidimensional foi realizada para a verificação do ponto isoelétrico (pI) e massa molecular. O grau de fluorescência da CfeBL foi determinado através do espectrômetro de fluorescência. Eritrócitos de coelho foram usados para avaliação da AH. A AH da CfeBL não sofreu alteração em presença de íons nem em diferentes valores de pH. A CfeBL continuou ativa após aquecimento à 100 ºC, foi parcialmente inibida pelo carboidrato N-acetil-D-glicosamina e as glicoproteínas fetuína, soro de coelho, azocaseína, caseína, ovoalbumina, soro fetal, tiroglobulina e peroxidase não inibiram a AH da CfeBL. A CfeBL apresentou duas bandas por SDSPAGE e o sistema Superdex 75-30 cm revelou dois picos protéicos com 19 e 15 KDa. Na eletroforese 2D a massa molecular estimada foi de 20 e 15 KDa e o pI de 4,53 e 5,14. Não foi observado crescimento de bactérias gram-positivas ou negativas em amostras de CfeBL. Uma lectina, CfeBL, específica para N-acetil-D-glicosamina, estável em diferentes temperaturas e variações de pH, foi obtida da entrecasca de C. ferrea por cromatografia de afinidade em quitina, com potencial atividade antimicrobiana
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Atividade de extratos de espécies arbóreas da caatinga sobre a emergência e desenvolvimento de plântulas de feijão-caupi, melão e milho / Extracts acitivity of tree species from Caatinga on the emergence and development of cowpea, melon and corn seeds

Oliveira, Andreya Kalyana de 26 February 2014 (has links)
Made available in DSpace on 2016-08-12T19:18:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AndreyaKO_TESE.pdf: 2078188 bytes, checksum: f46c8cd05065c06b6071c9f058738b3f (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this work was to analyze the activity of plants from Caatinga biome on the emergence and development of cowpea, melon and corn seedlings. From November 2011 to June 2012, on Laboratório de Análise de Sementes (UFERSA), the activity of extracts from seeds and leaves of juazeiro (Zizyphus joazeiro Mart.), jucá (Caesalpinia ferrea Mart.), mulungu (Erythrina vellutina Willd.) and cumaru (Amburana cearenses (Allemão) A. C. Smith.) in five levels of concentrations (1, 0.5, 0.25, 0.125 and 0%), in corn seeds (Zea. mays L.), melon (Cucumis melo L) and cowpea (Vigna unguiculata (L) Walp.). These tests corresponded to the first experimental part, in which each species and its respective organ integrated an experiment (E1, E2, E3 extracts of seeds of juazeiro on corn, melon and cowpea and E4, E5, E6 extracts of leaves of juazeiro on corn, melon and cowpea). On the second part of the study, it was made a fractionation of the extract of cumaru seeds with the solvents hexane, dichloromethane, ethyl acetate and water, where the activity of these extracts on the initial development of melon seeds was tested, as each portion with its respective dilution formed an experiment (E1 hexane fraction (1, 0.5, 0, 25, 0,.25, 0%), E2 dichloromethane fraction (1, 0.5, 0.25, 0.125, 0%), E3 - ethyl acetate fraction (1 and 0%), E4 water fraction (1 and 0%). On the last part, it was made a phyto-chemical prospection of the extracts resulting from the previous stage. The preparation of the dry and aqueous extracts used in this experiment, phyto-chemical prospection and fractionation were accomplished on Laboratório de Análise Cromatográfica (UERN) from November 2011 to February 2013. Statistical design was completely randomized with four replications with twenty seeds. Treatments were formed by the concentrations 1, 0.5, 0.25, 0.125 and 0%, corresponding to each extract. The evaluation of the behavior of the litmus test was made through the analysis of the percentage and emergence speed index characters, percentage of normal seeds, dry matter, aerial parts length and root and number of roots on corn. The averages were compared by Tukey test, at 5% possibility, analyzed by the statistical program SISVAR. In the end of the experimental analysis, we may conclude that leaves and seeds of the Caatinga biome species influenced reducing or increasing the average of the variables used on the evaluation of corn, melon and cowpea seeds development, and the effects were greater when in the presence of cumaru seeds extract. The extracts obtained from the hexane portion provided adverse effects on melon seeds development. Cumarina was the dominant composite on the phyto-chemical prospection on the cumaru seed extract / Este trabalho objetivou verificar a atividade de extratos de plantas da Caatinga sobre a emergência e desenvolvimento de plântulas de feijão-caupi, melão e milho. De novembro de 2011 a junho de 2012, no Laboratório de Análise de Sementes (UFERSA), testou-se a atividade de extratos de sementes e folhas de juazeiro (Zizyphus joazeiro Mart.), jucá (Caesalpinia ferrea Mart.), mulungu (Erythrina vellutina Willd.) e cumaru (Amburana cearenses (Allemão) A. C. Smith.), em cinco níveis de concentrações (1; 0,5; 0,25; 0,125 e 0 % ), em sementes de milho (Zea. mays L.), melão (Cucumis melo L) e feijão-caupi (Vigna unguiculata (L) Walp.). Estes testes corresponderam à primeira parte experimental, em que cada espécie e seu respectivo órgão nas diferentes doses de extrato formaram um experimento (E1, E2, E3 - extratos de semente de juazeiro no milho, melão e feijão-caupi e E4, E5, E6 - extratos de folhas de juazeiro no milho, melão e feijão). Na segunda parte do estudo, foi feito um fracionamento do extrato de semente de cumaru com os solventes hexano, diclorometano, acetato de etila e água, em que se testou a atividade destes extratos sobre o desenvolvimento inicial de plântulas de melão, de modo que cada fração com suas respectivas diluições formavam um experimento (E1- fração hexânica (1; 0,5; 0, 25; 0,125; 0%), E2- fração diclorometano (1; 0,5; 0, 25; 0,125; 0%), E3 - fração acetato de etila (1 e 0%), E4 - fração aquosa (1 e 0%). Na ultima fase, foi feita uma prospecção fitoquímica dos extratos resultantes da etapa anterior. O preparo dos extratos secos e aquosos usados no trabalho experimental, a prospecção fitoquímica e o fracionamento foram realizados no Laboratório de Análise Cromatográfica (UERN) no período de novembro de 2011 até fevereiro de 2013. O delineamento estatístico utilizado foi o inteiramente casualizado com quatro repetições com vinte sementes. Os tratamentos foram compostos das concentrações 1; 0,5; 0,25; 0,125 e 0%, correspondentes de cada extrato. A avaliação do comportamento das espécies teste diante dos extratos foi feito analisando-se as características de porcentagem e índice de velocidade de emergência, porcentagem de plântulas normais, matéria seca, comprimento de parte aérea e raiz e número de raizes no milho. As médias foram comparadas pelo teste de Tukey, ao nível 5% de probabilidade, analisadas pelo programa estatístico SISVAR. Ao final das análises experimentais, concluiu-se que as folhas e sementes das espécies da caatinga inteferiram diminuindo ou acrescentando as médias das variáveis empregadas na avaliação do desenvolvimento de plântulas de milho, melão e feijão-caupi e os efeitos foram ainda maiores na presença do extrato de sementes de cumaru. Os extratos obtidos da fração hexânica proporcionaram efeitos desfavoráveis ao desenvolvimento de plântulas de melão. A cumarina foi o composto predominante na prospecção fitoquímca do extrato de semente de cumaru

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