Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The storage and handling points of agricultural sprayers on farms are a contamination point source of punctual contamination in case of accidental spills of concentrated pesticide and / or leaks, among others. In order to avoid possible environmental contaminations, since the decade of 90 s have been developed biobed systems, where the handling of pesticides as well as agricultural implements washing are discharded on a mixture of straw, soil and peat (biomix). This mixture has the ability to retain and subsequently biodegrade pesticides. In this study was validated an analytical method applied for routine analysis to determine the organophosphate pesticide chlorpyrifos in biobeds. The method is based on 5 g sample extraction with 30 mL of acetone acidified with phosphoric acid 98:1:1 (v/v/v). After homogenization, centrifugation and filtration, 125 μL of the extract was evaporated and reconstituted in 5 mL of methanol acidified with 0.1% acetic acid. The analysis was performed on a liquid chromatographic system coupled to a tandem mass spectrometer (UPLC-MS/MS). The validation parameters evaluated were calibration curve linearity (r2), accuracy (spike and recovery %), limits of detection (LOD) and quantification (LOQ) of the instrument and the method, precision (RSD%) and matrix effect. To the linearity study analytical solutions were prepared in organic solvent and matrix extract at 0.1; 0.5; 1; 5; 20; 100; 250 ng mL-1. The recovery study was conducted on samples spiked at three concentrations (2, 10 and 50 mg kg-1) with seven replicates (n = 7) for each concentration and the values obtained were between 96 and 115% with RSD values lower than 20 % for all three concentration levels studied. The real LOQ obtained was 2 mg kg-1 and the matrix effect observed was lower than ± 20%, which demonstrates that there is not considerable suppression or enhancement in the analyte signal. The biobed system efficiently degraded chlorpyrifos in both 1) simulation of accidental spillage and 2) application of diluted pesticide solution. In the latter case, all the values obtained at the final sampling time (14 months) were below the real LOQm. / Os pontos de estocagem e manuseio de pulverizadores agrícolas em fazendas são uma fonte de contaminação pontual no caso de derrames acidentais do agrotóxico concentrado e/ou vazamentos. A fim de evitar possíveis contaminações ambientais, desde a década de 90 tem sido desenvolvidos sistemas de camas biológicas, onde o manejo de agrotóxicos bem como a lavagem de implementos agrícolas é feito sobre uma mistura de palha, solo e turfa. Esta biomistura tem a capacidade de reter e posteriormente biodegradar os agrotóxicos. Neste estudo foi validado um método para análises de rotina para determinação do agrotóxico organofosforado clorpirifós em camas biológicas. O método baseia-se na extração de 5 gramas de amostra com 30 mL de uma solução de acetona acidificada com ácido fosfórico 98:1:1 (v/v/v). Após homogeneização, centrifugação e filtração, 125 μL do extrato foi evaporado e reconstituído em 5 mL de metanol acidificado com 0,1% de ácido acético. A análise foi realizada em um sistema de cromatografia líquida acoplado a um espectrômetro de massas tandem (UPLC-MS/MS). Os parâmetros de validação avaliados foram linearidade da curva analítica (r2), exatidão (fortificação e recuperação em %), limites de detecção (LOD) e quantificação (LOQ) do instrumento e do método, precisão (RSD %) e efeito matriz. Para o estudo de linearidade as soluções analíticas foram preparadas em solvente orgânico e em extrato de matriz, a 0,1; 0,5; 1; 5; 20; 100; 250 ng mL-1. O estudo de recuperação foi realizado em amostras fortificadas em três concentrações (2, 10 e 50 mg kg-1) repetido sete vezes (n=7) para cada concentração. Os valores obtidos ficaram entre 96 e 115% com valores de RSD inferiores a 20% para os três níveis de concentração estudados. O LOQ real obtido foi 2 mg kg-1. O efeito matriz observado foi inferior a ± 20%, o que demonstra que não há supressão ou aumento considerável no sinal do analito. O sistema de camas biológicas foi eficiente para a degradação de clorpirifós em ambos 1) simulação de derrame acidental e 2) aplicação de solução diluída do agrotóxico. Neste último caso, todos os valores obtidos ao final das etapas de amostragem (14 meses) ficaram abaixo do LOQm real.